鸭圆环病毒全基因组克隆与序列分析.pdfVIP

第24卷第2期 病 毒 学 报 V01．24No．2 1 1 1 1篁!星 呈坚!望星!三!呈坚里些垒兰坌三兰!垦皇兰皇坌兰 丝!：!! !!!! 鸭圆环病毒全基因组克隆与序列分析 傅光华，程龙飞，施少华，彭春香，陈红梅，黄瑜‘ (福建省农业科学院 畜牧兽医研究所，福州 福建350013) 摘要：为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性，运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2 条核苷酸序列，拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析。结果表明所获病毒核酸为大小 1 所扩增的核酸序列为鸭圆环病毒基因组序列。 关键词：鸭圆环病毒，全基因组克隆，序列分析 中图分类号：S858．32文献标识码：A 文章编号：1000-872l(2008)02—0138—06 引起禽类免疫抑制的病毒包括马立克氏病毒、 过禽流感疫苗的鸭仍然发生高致病性禽流感。为揭 传染性法氏囊病毒、网状内皮增生病毒、鸡传染性贫 示以上现象之原因，我们在实施国家自然科学基金 项目——不同源禽1型副粘病毒跨种间致病及其相 血病毒和圆环病毒(Cireovirus)等[1]，其中圆环病毒 是近年来新发现的一种病毒，它可引起鹅、鸽子及鹦 关基因研究的过程中，对鸭免疫抑制性病毒感染开 鹉等多种禽类发生原发性感染甚至死亡[23，另外该 展了病原学研究。本研究根据国外已发表的鸭圆环 病毒还可侵害禽免疫系统，导致禽机体免疫功能下 病毒序列，运用重叠PCR技术自鸭法氏囊及脾脏中 降，易遭受其他疾病的并发或继发感染，从而造成更 扩增出1株圆环病毒(MH25株)全基因组序列，并 大的经济损失[3“]。 进行了生物信息学分析。 圆环病毒为无囊膜、二十面体对称的动物病毒 颗粒，其基因组为单股负链环状DNA，为最小的致 拣料与方法 病性动物病毒[1’5]。根据2004年国际病毒分类委员 1病料、菌种和克隆载体等 试验病料为采自福建省福州 会(ICTV)分类报告[6]，圆环病毒科(Circoviridae) 市闽侯某养鸭场生长缓慢的25日龄半番鸭的脾脏和法氏 下设3个属：圆环病毒属(Circovirus)、环病毒属 囊，大肠杆菌DH5a和克隆载体pMD18一T均购自大连 (Cryrovirus)和Anellovirus属，现已报道的鸽圆环 TaKaRa生物工程有限公司。 eireo— 病毒(Pigeoneireovirus)、鹅圆环病毒(Goose 2主要试剂 disease andfeather virus)、鹦鹉喙羽病病毒(Beak DNA 公司，Taq virus)和金丝雀圆环病毒(Canaryeircovirus)等均 归为圆环病毒属[7’8]。 Amresco公司，限制性内切酶购自MBI公司。 近些年来，以往在鸭、鹅等水禽中呈隐性感染的 3病毒基因组DNA的提取将保存于低温冰箱的病料按 一些病毒(如禽流感病毒和禽1型副粘病毒等)对水 2|，鸭的新病毒性疫病(新 释，反复冻融3次后，取lml于室温12000r／min离心5rain， 禽表现