黑曲霉果胶裂解酶和聚半乳糖醛酸酶合成的发酵调控.pdfVIP

黑曲霉果胶裂解酶和聚半乳糖醛酸酶合成的发酵调控 张 蕊，陈慧洁，章银军，汪 钊 (浙江工业大学生物与环境工程学院，浙江杭州，310014) 摘 要 003液态发酵过程的调控，制备了高活性的果胶裂解酶，并讨论 通过对黑曲霉(A5声e僧izz“j，ligPr)wz 了发酵过程中聚半乳糖醛酸酶活力的变化情况。实验表明，发酵产酶培养基组成为(g／L)：麸皮60，玉米粉40， 酵母膏20，胡萝卜12，CaC0。10。培养条件为：初始pH6．5，30℃，接种量8％，培养2d。此时果胶裂解酶活力 U／mL。 为375．3U／mL，为基础条件下的6．225倍，而聚半乳糖醛酸酶的合成得到了有效控制，酶活仅为29．4 改变发酵条件，有利于聚半乳糖醛酸酶的发酵生产，此时酶活力为基础条件下的5．05倍。 关键词 黑曲霉，液态发酵，果胶裂解酶，聚半乳糖醛酸酶 自1980年代以来，对果胶低聚半乳糖醛酸的研的制备，同时在发酵过程中控制PG的合成，减少PG 究已引起了国内外学者的广泛关注[1叫]。果胶酶 的影响，同样改变控制条件也可获得较高活力的PG。 (pectinolyticenzyme)是分解果胶质的一类酶的总 1材料和方法 称[51，其中主要是聚半乳糖醛酸酶(polygalacturo— 1．1实验材料 nase，简称PG)、果胶裂解酶(pentinlyases，PL)。自 然界中，许多不饱和物质通常具有饱和物质所不具备 1．1．1 茵 种 的独特的生物活性，因此如何减少酶系中其他组分的 黑曲霉(AspPrgiZZ越sn堙8，．)wz003菌株，由浙江 影响，从而获得高活力的果胶裂解酶来制备不饱和果 工业大学生物与环境工程学院实验室保藏。 胶低聚糖的研究具有重要意义。 1．1．2斜面培养基(查氏培养基[1胡) NaN03 1 g，KClO．59，MgSO． PMG水解高酯化果胶分子的a一1，4糖苷键，而 29，K2HP04 PG则通过水解作用切断果胶酸分子的a一1，4糖苷O．59，FeSO‘O．019，蔗糖3g，琼脂15～20g，水1000 min。 键，形成相应的饱和低聚半乳糖醛酸。后者对果胶 mL，pH自然。121℃灭菌20 的水解速度及程度随果胶酸酯化程度的增加而降低， 1．1．3基础培养基 麸皮10．O mL，pH中性。 与PE的协同作用可加速降解；对寡聚半乳糖醛酸的 g，豆饼粉4．0g，水50 121℃灭菌20min。 水解作用也随着聚合度的长度减少而降低[6]。endo_ PG可将果胶降解为小分子，使果胶粘度降低并释放 1．1．4主要试剂 4．2， 还原末端。PL只能裂解贴近甲酯基的a一1，4糖苷 DNS试剂，磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液(pH pH6．8)，半乳糖醛酸。 键，裂解反应遵循口一消去机制，生成在非还原末端的 果皮粉的制备：将果皮粉50℃烘干，用粉碎机粉 C4和C5