膜铁转运蛋白1在缺氧缺血脑室周围白质软化大鼠动物模型和细胞模型中与表达及意义.pdf

膜铁转运蛋白1在缺氧缺血脑室周围白质软化大鼠动物模型 和细胞模型中的表达及意义 中文摘要 第一部分 缺氧缺血脑室周围白质软化大鼠动物模型的建立 【目的】 建立新生4 日龄SD 大鼠缺氧缺血脑室周围白质软化（PVL ）动物模型，通过形 态学、分子生物学及神经行为学方法对该模型进行评价。 【方法】 1. 新生4 日龄SD 大鼠通过随机数字表法随机分为两组：对照组和PVL 组；对 照组仅分离双侧颈总动脉不予结扎和缺氧，PVL 组采用双侧颈总动脉结扎联 合缺氧方法建立PVL 动物模型。 2. 应用HE 染色法观察脑组织结构病理学改变，以免疫荧光组织化学染色法和 蛋白免疫印迹法（Western blot ）检测HI 后12 周内APP 和MBP 表达变化， 观察轴突和髓鞘损伤情况。 3. 观察并记录对照组和PVL 组大鼠术前至HI 后7 周体重变化，以感觉反射实 验、悬吊实验、悬崖逃避实验和倾斜板实验测定HI 后12 周感觉运动功能变 化，应用Morris 水迷宫实验检测HI 后12 周大鼠认知功能水平。 【结果】 1. 对照组存活率为 100%；PVL 组存活率为 89.2%，存活者约 10%存在单眼或 双眼未能睁开，偶可出现单眼或双眼白内障。 2. HE 染色可见脑室周围白质纤维排列紊乱、疏松、胶质细胞增生和脑白质软化 灶形成；皮质和海马轻度损伤。 3. 免疫荧光组织化学染色法和Western blot 法显示，HI 后PVL 组APP 表达较对 照组增强，而MBP 表达量均较对照组降低，差异具有统计学意义（P ＜0.01 ）。 4. HI 后7 周内，PVL 组体重增长缓慢，与对照组相比差异具有统计学意义（P ＜0.01 ）。 5. 对照组平均睁眼时间为 13.33±0.58 天，PVL 组为21 ±2.0 天，较对照组明显 5 延迟 （P ＜0.01）。 6. 对照组出现耳廓反射的时间为15.33±0.58 天，PVL 组为20.67 ±1.53 天，较 对照组明显延迟（P ＜0.01 ）。 7. HI 后4 周、8 周与 12 周，与对照组相比，PVL 组双臂悬吊时间缩短、悬崖 逃避能力减弱、倾斜板实验转头时间延长（P ＜0.05 ）。 8. Morris 水迷宫实验从游泳曲线、平均逃避潜伏期、平均游泳速度、穿越平台 次数和靶象限时间百分比进行比较，发现PVL 组大鼠于HI 4 周、8 周与 12 周认知功能水平均较对照组低（P ＜0.05 ）。 【结论】 1. PVL 组大鼠主要表现为脑室周围纤维排列紊乱、疏松和白质软化灶形成，并 出现轴突损害和髓鞘生成障碍；皮质和海马存在轻度损伤。 2. PVL 组大鼠出现生长发育障碍，在HI 4 周、8 周与12 周即幼鼠期、青春期 与成年期均可出现感觉运动功能减弱和空间学习记忆能力减退。 3. PVL 组大鼠出现的组织病理结构改变及生长发育和神经行为学功能障碍与 临床PVL 患者的特征相一致。 4. 新生4 日龄SD 大鼠经双侧颈总动脉结扎联合缺氧成功建立缺氧缺血脑室周 围白质软化动物模型。 【关键词】 脑室周围白质软化，动物模型，缺氧缺血，感觉运动，认知 第二部分 膜铁转运蛋白1 在缺氧缺血脑室周围白质软化大鼠模型中的 表达及意义 【目的】 1. 明确PVL 4 周内不同脑区（皮质、海马和脑室周围白质）铁分布和铁含量的 变化。 2. 明确PVL 4 周内不同脑区（皮质、海马和脑室周围白质）FP1 在mRNA 和 蛋白水平的表达变化。 3. 探讨FP1 在PVL 发病中的意义。 6 【方法】 1. 新生4 日龄SD 大鼠随机分为对照组和PVL 组，对照组仅分离双侧颈总动脉 不予结扎和缺氧，PVL 组采用双侧颈总动脉结扎联合缺氧方法建