凝胶图像处理系统定量检测乙型肝炎病毒DNA(d).pdfVIP

维普资讯 ·144 · 上海医学拉蛩杂志 2001年第 l6卷第 3期 文章编号：1001一Z08762~I)03—0144—03 凝胶图像处理系统定量检测乙型肝炎病毒DNA 吴晓蔓，郓海波 (广州医学院附属第二医院，广州 510260) 摘要：目的 建立一种聚合酶链反应 (PCR)一凝脏图像处理系统定量分析核酸扩增产物的方法。方法 I．用 PCR荧光定量分析仪实时监擐fPCR扩增曲线，并选择合适的扩增循环次数；2．将梯度标准乙型肝炎病毒 (HBV) 阳性血清(10～10拷贝 1)分别进行4o，35及32次循环次数的扩增t经琼脂糖电辣进行凝脏分析；3．选择凝脏 分析软件中能客观反映梭醺实际含量的最适参数，制定标准曲线。结果 40厦 35次循环时，在 10～1 拷贝／ffl 线性 良好，而在 1O‘，10及 l舻拷贝， 3十梯度时直线上升缓慢 ，趋于平坦。32次循环时，10拷贝／1未能检出． 10～10拷贝／ 的5十梯度的模板(对数值)与产物(体积)有 良好的线性关 系(r=u0．97)．结论 32次循环线性范 围较广．为最适循环次数；在uVIband的吸光度定量分析指标中．以体积或体积百舟比作为定量指标较好。 关键词：荧光定量聚合酶链反应；凝脏成像分析；榜酸扩增产物；乙型肝炎病毒脱氧核糖棱酸 中田分类号：R446．61 文献标识码：A QuaRtltativedetectionofHBV—DNAoBgeIdocumentationsystems． WUXiaoman，GU0Haibo．ThcSecond AffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollege，Guangzhou510260，China Abstract：OhiectlveToestablishImlymeraseehalnreaction-geldocumentationsystems(PCR—GDS)technoic~ gYfordetectingnucleicacidamplificationproducts．MethodsI．PCRamplificationcurvewasobservedwithfluores— cencequantitativePCR (FQ—PC R)．and~uitablecyclenumberswereselected．2．StandardHBV—DNA sera (10 10copies／td)wereamplified40，35and30cyclesseparately．ThePCRproducts-w-oregelelectrophoriedandEB stained，thenanalyzedwithGDs．ResultsWhencyclesWel-e40and35，linearitywasgoodinstandardsera10’一l0 coples／~l，hutlinewasnearlyfiatin10一10copies／ffl；whencycleswere32．10copies／vlcannotbedetected，and linearitywasg∞dinl0一1o矗copies／vl(r—O．98)．Conclusion32cycleswo_2-esuitablecyclenumbertorPC R—GDS． AmongquantitativeanalysisofGDS，parametersofvolumeandvolume9ercentagewerebetterthanothers． KeyWordslFluorescencequantitative—polymerase—chain—reaction；Geldocumentationanalysis；Nueleicacid amplificationproducts；HepatitisBvirusDNA 在常规的实验室检测中，对聚合酶链反应 PCR仪 (PerkinElmer