足细胞内质网应激对钙神经蛋白表达与调控研究.pdfVIP

中文摘要 背景 在我国，糖尿病肾病(diabetic renal nephropathy,DN)是终末期肾病(endstage disease，EsRD)的第二大原因。其发病机制复杂，至今未得到全面的认识，也没有 酶，能调节足细胞骨架蛋白synatopodin的稳定性。内质网应激是指细胞内质网未折 叠或错误折叠蛋白堆积时引起的细胞应激反应。近来有研究提示在内质网应激 reticulum mellitus， stress，ERS)时CaN活性增加。糖尿病(diabetes (endoplasmic DM)状态下体内棕榈酸盐升高，体外细胞试验证明棕榈酸盐能引起ERS。熊去氧 acid，UDCA)是内质网应激的化学分子伴侣，体外大鼠肝细 胆酸(ursodeoxycholic 胞及糖尿病模型小鼠实验都证明UDCA能降低ERS感应蛋白PKR类似的内质网激 ER 酶(PKR．1ike la， enzyme 胞是维持肾小球滤过屏障的主要成分，足细胞数量减少、足突消失是DN损伤时引 起蛋白尿的重要原因。我们的前期工作发现早期DN中存在足细胞ERS，但ERS 对足细胞CaN的调控尚无报道。进一步深入研究足细胞ERS对CaN的影响对糖尿 病肾病甚至蛋白尿患者临床上是否以及怎样合理选择使用钙神经蛋白抑制剂 (calcincurin 白尿发病机制中的作用。 目的 以体内、外试验方法，探讨糖尿病肾病状态下，足细胞内质网应激时钙神经蛋 白的变化。 方法 对照，分6周龄、9周龄和12周龄3组，使用激光共聚焦法检测肾小球足细胞CaN 的变化特点。另以棕榈酸盐或联用UDCA为刺激物，作用于永生小鼠足细胞系，观 察其对足细胞CaN表达的影响。使用Real．TimePCR的方法观察不同棕榈酸盐浓度 刺激下足细胞CaNmRNA水平的变化；使用激光共聚焦法和western blotting方法 在蛋白水平检测棕榈酸盐或联用UDCA后足细胞CaN的变化；western blotting方法 同时观察足细胞骨架蛋白synpatopodin的变化。 7 结果 (1)db／db糖尿病肾病模型小鼠肾小球足细胞CaN的表达随尿蛋白量的增加而 5001．tM而明显增加，高低浓度表达的差异具有统计学意义，p0．05；激光共聚焦检 测棕榈酸盐作用下足细胞CaN的表达上调，而加用UDCA后CaN的表达下降， p0．05；western blotting法证明棕榈酸盐作用下足细胞CaN的表达上调，而加用 UDCA后CaN的表达下降。 结论 (1)db／db糖尿病肾病模型小鼠足细胞中，随尿蛋白增加，足细胞骨架蛋白 (2)体外研究发现，足细 synaptopodin表达下降，ERS时存在CaN表达的升高。 胞ERS时对CaN的表达有正向调节作用。 关键词 足细胞，棕榈酸盐，熊去氧胆酸，钙神经蛋白，synaptopodin，内质网应激 8 Abstract Background Diabetic thesecondCaUSe renaldiseaseinChina ofend nephropathy(DN)i