R周勤华金黄色葡萄球菌A蛋白基因的克隆_表达和纯化.pdfVIP

第 19卷第 3期 2007年 5月 嘉兴学院学报 Vo l. 19 No. 3 2007. 5 　 　　　　 J ou rna l of J iax ing Un ivers ity 　　　　　　　 ·87 · 金黄色葡萄球菌 A 蛋白基因的克隆、表达和纯化 周勤华 (嘉兴学院医学院 , 浙江嘉兴 3 1400 1 ) 摘 　要 : 通过 PCR 方法从金黄色葡萄球菌 Cowan Ⅰ菌株中克隆获得的 A 蛋白基因 , 与表达载体 p ET2 1a 连接 , 将带有 目的基因的质粒转化到表达宿主 E coli BL2 1 (D E3) 中并进行 IPTG诱导表达 , 表达产物进行 Q - sep haro se 纯化 , 初步获得了金黄色葡萄球菌 A 蛋白。 关键词 : 金黄色葡萄球菌 A 蛋白; 克隆; 表达 　中图分类号 : R378. 1 The C lone, Expression and pur if ica tion of Staphy lococca l Prote in A ZHOU Q in - hua (M edical Co llege of J iaxing U n iversity, J iaxing, Zhej iang 31400 1) A b stract: The gene coding for p rotein A from Stap hylococcu s A u reu s was cloned by po lym era se chain reaction, and it was in serted to p la sm id p ET2 1a. The con structed p la sm id wa s tran sferred to E coli BL2 1 (D E3) and was ex p ressed by IPTG inducem en t. W e ob tained Stap hylococcal p rotein A by Q - sepharo se p urification. Key word s: Stap hylococcu s Au reu s Protein A ; clone; exp re ssion 文献标识码 : A 　文章编号 : 1008 - 6781 (2007) 03 - 0087 - 03 　　金黄色葡萄球菌 A 蛋白 ( SPA ) 是金黄色葡萄球菌 ( Stap hylococcu s au reu s) 的一个胞壁组分 [ 1 ] , 编码野生型 A 蛋白基因的序列从 N 端至 C 端依次由 S、E、D 、A 、B 、C、X 结构域组成 , 其中 S为 信号肽 , E、D、A 、B 、C 结构域各由 58 个左右氨基酸组成 , 它们之间约有 65% ～90% 的同源性 , 被认为具有与抗体 IgG结合的功能 , C末端 X 结构域是一个与细胞壁结合的组分 , 通过胞壁肽聚糖以 共价键结合 , 不具有与抗体结合的能力 [ 2 - 3 ] 。 Kronval和 Grey等人首先发现了某些 IgG亚类能与金黄色葡萄球菌 A 蛋白反应 , Ey, PL 等人利 用 SPA - Sep haro seCL - 4B , 用改变洗脱液 pH 值的方法 , 成功地使 IgG1、 IgG2 a、 IgG2b 以近 100%的 收率得到分离 [ 4 ] 。此后 , 研究者们利用 SPA 做了大