《血红蛋白的提取和分离》.pptVIP

* 1、蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 一、血红蛋白的提取和分离 2、提取分离方法 凝胶色谱法 电泳法 （一） 凝胶色谱法（分配色谱法） 2.凝胶： 大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。 根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶，来进行分离。 1.概念： 凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示 （二）缓冲溶液 1.概念: 在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不变的混合溶液。 能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维持PH基本不变。 2.作用: （三） 电泳： 1.概念： 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2.原理： 分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 3.常用电泳方法: 琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。 二、实验操作 样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定 1.样品处理： （一）蛋白质提取和分离步骤 （二）操作过程 可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。 血液 血浆 水 分 固体物质： 血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等 血细胞 白细胞 血小板 红细胞 （最多） 血红蛋白 （90％） 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁血红素基团 2.提问：血液有哪些成分？ 1.提问：用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。 血红蛋白 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁血红素基团 每个肽链环绕一个亚铁血红素基团， 此基团可携带一分子O2或一分子CO2，血红蛋白因含有血红素而 呈红色。 血红蛋白的特点： (1)红细胞的洗涤: 去除杂质蛋白，利于后续血红蛋白的分离纯化. ①目的: (2)血红蛋白的释放： 加蒸馏水到原血液体积， 加40％体积的甲苯 （溶解细胞膜） 置于磁力搅拌器搅拌10min（加速细胞破裂） 红细胞破裂，释放出血红蛋白 (3)分离血红蛋白溶液： ①过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min。 ②试管中溶液层次： 第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）； 第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）； 第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）； 第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。 ③分离： 滤纸过滤：除去脂溶性沉淀层， 分液漏斗中静置：分出下层的红色透明液体。