梯度PCR在基因扩增研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 中国误诊学杂志2008年4月第8卷第 11期 ChinJMisdiagn，Apr2008Vol8No．11 【研究原著】 梯度PCR在基 因扩增研究中的应用 王德文 ，王铁兵 ，陈海霞。，王晓春。 【摘要】 目的：探讨和尝试一种较为迅速确定最佳退火温度 的方法来扩增 目的基 因。方法 ：采用梯度PCR对醛 固酮 合酶基因(CYP11B2)进行扩增 ，通过凝胶呈像技术判断cYPllB2基因最佳退火温度 。结果：与普通PCR相 比，梯度PCR 能够迅速地确定CYP11B2基因的最佳退火温度 。结论 ：梯度PCR简单、直观、快速 ，适用于各种核酸分子 的扩增 ，具有高 效率、高通量 的优点，有着广 阔的应用前景 。 【主题词】 聚合酶链反应 ／方法 ；基 因扩增 【中图分类号】 R394—33 【文献标识码】 A 【文章编号】 1009—6647(2008)11—2527—03 UseOfGradientPCR in GeneAmplificationStudy WANG De—wen，WANG Tie—bing，CHEN Hai—xia，eta1． (Dongguanbloodcenter，Dongguan523930，China) [Abstract] Objective：ToexploreamethodforquickeridentificationoftheoptimalannealingtemperatureinPCR． M ethods：GradientPCRwasemployedinanalysisofaldosteronesynthase(CYP11B2)genepolymorphisms，andgelImag— ingTechnologywasusedtodeterminetheoptimalannealingtemperature．Result：ComparedwithnormalPCR，Gradient PCR couldidentifythetheoptimalannealing temperatureofaldosteronesynthasegene．Conclusions：GradientPCR is simple，efficientandrapid，withabroadapplicationprospects，which suitableforPCR ofallkindsofgenes． [MESH] PolymeraseChainReaction／methods；GeneAmplification 自20世纪70年代人类第一个单基 因病的致病基 协会诊断标准。 因被克隆以后 ，医学界即开始关注基 因的问题 ，研究方 1．2 试剂和仪器 全血基 因组提取试剂盒 以及引物 向遍及 临床医学各领域 ，聚合酶链反应 (Polymerase Forwardprimer：5一CAG GAG GAG ACC CCA TGT ChainReaction，PCR)作为分子生物学中最基本 的操 GAC一3和 Reverseprimer：5一CCT CCA CCC TGT 作技术 ，在基因与疾病关系的研究中发挥着重大 的作 TCA GCCC一3均购 自北京鼎国生物工程公司；Ther— 用 ，但是在 日常实验 中PCR反应经常出现两种情况： moHybaidPX2型PCR仪为美国Thermo公司制造； 一 种是产生大量非特异性产物 ，另一种情况是未扩增 DYY一Ⅲ5型稳压稳流电泳仪为北京六一仪器厂生产； 出任何产物。影响PCR的因素很多，退火