端粒酶基因与抗凋亡基因bcl-2在肺组织中的表达的研究.pdfVIP

螬粒酶基因和抗凋亡基因beI一2在井组织中的表达的研究279 端粒酶基因和抗凋亡基因bcl一2在肺组织中的表达的研究 周宏远熊小靛陈蔚蔚周清华王世春 肺癌的发生、发展及预后与端粒酶基因的活化和抗癌基因的失活有密切的关系。除了凋 亡的失调可致肿瘤的发生，端粒酶的激活也是肿瘤发展的原因之一。端粒酶的调控除了受其 可调节端粒酶的活性。对端粒酶基因和调控的研究一方面为端粒酶的激活是肿瘤发生的原因 还是结果提供有力佐证，另一方面为寻找抗端粒酶的抗肿瘤药物和以hTR、hlXRT为靶点的肿 瘤基因治疗提供理论基础。 材料与方法 (一)标本来源 人肺组织标本来源于四川大学华西第一医院胸心外科手术切除肺部肿块的病人。肺组织 切除后半小时内放于液氮保存。共收集38例肺癌标本．其中男性20例，女性18例，年龄26。 病例取病灶、癌旁(肉眼不见癌)组织。所有病例经病理学诊断证实，病理分期采用UlCC(国际 抗癌联盟)1997年修订的分期标准。 (二)方法 操作步骤严格按药盒说明书进行。PCR产物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影。 100mg组织加入1 均浆1—2 rain。加入1．2 min，然后用VortⅨ振荡混匀，冰浴10 ml氯仿。充分振荡或上下来回 000 颠倒数次，稍静置出现分层后，随即于4℃，12 心管中，注意不要吸到中间层的蛋白沉淀，加入等体积异丙醇(4℃预冷)混合4T：放置1h后， 500 于4℃，12 r／min离心20min，沉淀即所需的总RNA加入2ml75％乙醇，晃荡洗涤一次，小 心倒掉乙醇，用干净的一次性塑料手套套住离心管的管口，于37℃烘箱烘干，然后加人30皿 DEPC处理一70℃保存待用。RT—PCR采用德国宝灵曼公司的啊叫严一步法药盒。 修复，DAB染色。苏木紊复染。bcl一2阳性反应为胞浆棕色。利用COOLCCD高分辨率图像分 作者单位：610041成都，四川大学华西医院肿瘤研究所(周宏远熊小熊陈蔚蔚周清华)；四川大学华西 基础法医学院病理科(王世舂) 中国癌症研究进展@ 析系统和SPOT 断信号的强弱。 结 果 (一)肺组织中端粒酶活性及其基因的表达的关系 38例肺癌组织中32例为端粒酶阳性，其相应的癌旁组织全为端粒酶阴性。在端粒酶阳 在端粒酶阳性的肺癌组织中表达远高于端粒酶阴性的肺组织。且其表达水平有显著的差异 (P0．05)。 (二】bd一2与hill的关系 ． 38例肺癌患者中，h1R在肿瘤组织中表达高于其相应正常组织的有9例，通过分析bd一2 在ⅥR癌组织表达高过癌旁组织与hTR癌组织中表达相当于癌旁组织中表达的差异，发现前 者bcl一2表达水平远高于后者，也即蝴水平的升高伴随着bd一2表达量的增强，统计学分 癌旁组织中表达均为阴性，其bd一2的表达也较低。38例癌旁组织中，m表达阴性的有4 例，此4例癌旁组织中bcl一2表达低于其癌组织。同时可见癌旁组织中bcl一2的表达显著低 于癌组织。见表1。 裹1 bd一2与m的关系(j±i) (三)bd一2与加：Elrr表达的关系 裹2 hd一2与hTERT的相关性分析I；±$J 墙柱酶基因和抗舅亡基因bd一2在肺组织中的表达的研究 281 讨 论 本研究结果显示端粒酶的基因与抗凋亡基因bel一2在肺癌的发生发展过程中有正相关 的作用。端粒酶基因在肺癌中的上升调节可能是在bcl一2的协同作用下实现的。抗凋亡的 结果可导致肿瘤细胞的寿命延长，增加了其他癌基因激活和抑癌基因失活的机会，端粒激活也 能导致肿瘤细胞的无限增殖，因而二者协同作用可能加剧细胞转化的过程，使肿瘤表现出较差 hd一2的过度表达有多功能的特征，包括抗凋亡、促进