三株递呈猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的生物学特性研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 三株递呈猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门茵的 生物学特性研究 梁恩涛1，陈杰1，黄小波1，一，曹三杰l2．，文心田1,2，张丹1，张小会1，朱书权1 (I．四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室，四川雅安625014； 2四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心，四川成都611130) 摘要：为了探完减毒沙门氏菌均递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性，本研究对3株携 带不同大小S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估。用RT-PCR方法扩增了s黜(长456 bp，编 码S蛋白N末端499-650位氨基酸)、S册基因(长873 367 构建的SL7207(pVAXD．S1．789)(长2bp，编码S蛋白N末端1—789位氨基酸)菌株的生物学特性研究，包括生 长曲线测定、携带质粒的体内／外稳定性、回肠组织内的转录、在小鼠体内动态增殖规律、口服小鼠的安全性 稳定性；携带的目的基因可在肠道组织内转录；菌株在小鼠肝、脾中增殖约5周后逐渐被机体清除；口服小鼠具 有良好的安全性。本研究结果表明减毒鼠伤寒沙门茵SL7207可递呈不同长度的s基因抗原片段，为后续开展3 种茵株的实际口服免疫效果比较研究奠定了基础。 关键词：猪流行性腹泻病毒；s基因；减毒鼠伤寒沙门菌；口服；生物学特性； 是位于病毒囊膜表面的纤突糖蛋白，由1383个氨基 猪流行性腹泻(Porcine diarrhea，PED) epidemic diarrhea 是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic 酸残基(aminoacids，aa)构成，在决定细胞亲嗜性131、 致病性l钔、诱导机体产生保护性抗体嘲等方面起着关 virus，PEDV)ZJI起的以持续性腹泻、脱水和对哺乳仔 猪高致病率、高死亡率为主要特征的一种高度接触 键作用。因此S基因是PEDV基因工程疫苗的主要 抗原靶基因。 性肠道传染病llI。PEDV感染仔猪的靶器官是小肠， 局部肠道黏膜免疫对阻止病毒的入侵具有重要作 以减毒沙门菌为载体的疫苗具有口服免疫方 用。现有灭活苗不能产生有效的肠道粘膜免疫；弱 便，能激发强烈的局部黏膜免疫、体液免疫和细胞 毒苗虽然能刺激产生一定的黏膜免疫保护力，但存 免疫，自身具有免疫佐剂效应等许多优点，已广泛 在散毒及毒力返强的潜在风险，因此开发研制能诱 应用于病毒【lOl、细菌II·I、寄生虫112】等口服疫苗的研 导产生高水平肠道黏膜免疫的新型疫苗是PEDV疫究。减毒沙门菌是构建口服疫苗较好的菌株载体， 苗研究的新方向121。 但良好的口服免疫效果与携带的目的基因表达量有 关系，通常目的蛋白的表达效果与重组菌株在机体 PEDV病毒粒子为有囊膜的RNA病毒，s蛋白 author *Corresponding 基金项目：国家自然科学基金项目；国家自然科学基金项目 作者简介：粱恩涛(1989．)，男，河南平顶山人，硕士研究生，主要从事猪流行性腹泻新型口服疫苗的研究． +通信作者：E·mail：哪bl10@126．corn 一152— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 内的稳定性、携带基因的长度等有一定关系【13l。 S 本研究结合PED