白腐菌对木质纤维素降解选择性研究.pdfVIP

第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集 2007．07．15-18威海 白腐菌对木质纤维素的降解选择性研究 许海朋 黄峰· 高培基 山东大学微生物技术国家重点实验室，济南，250100 摘要：本文用平板显色法研究白腐菌对木质纤维素的降解选择性，筛选到选择性降解纤维素的白 腐菌3株，选择性降解木质素的白腐菌8株，降解选择性不强的菌株7株。实验发现有些白腐菌对 于不同的木质纤维素原料具有不同的降解选择性，而且这种选择性容易受到培养条件的影响，尤其 是氮源含量的影响。 引言： 世界石油等化石燃料供应的短缺，天然气和其他原料价格的上扬，以及对温室气体 减排的要求，已迫使人们转向可再生能源，关注生物燃料的发展前景。木质素是地球上 主要的可再生芳香碳源物质，估计植物光合作用所固定的碳中的25％最终要转化成木质 素，是地球上在数量上仅次于纤维素的可再生资源，从固定的能量上看，它是地球上含 能量最多的有机化合物，所以我们有理由认为，木质素本身就是一种非常有价值的潜在 的能源，对它的开发利用意义重大。然而，在实际应用中，木质素并没有得到很好的利 用，反而成为充分利用纤维素生产乙醇、糖和蛋白的障碍，甚至造成了严重的污染问题。 木质素之所以成为纤维素利用的障碍，造纸过程中之所以产生污染，归根结底是因 为木材、秸秆等木质纤维素材料中同时含有纤维素和木质素两种成分，而其中木质素成 and 分需要予以除去所致(Eriksson，1985；ErikssonKirk，1985)。为了除去木质素， 在造纸过程中使用化学试剂，而溶解并携带化学试剂的造纸废液无法回收利用，排放到 江河湖海中污染了环境。可见木质素降解的研究无论是对于国民经济发展还是环境保护 都具有非常重要的意义。 白腐菌作为自然界中唯一可以将木质素完全降解为C0：和H。0：的微生物，无疑为 我们研究开发利用木质素提供了很好的模型，为我们勾画出了美好的前景。然而，白腐 菌在降解木质素的同时也会降解纤维素和半纤维素，人们希望能够得到选择性降解木质 素，不降解或者很少降解纤维素和半纤维素的菌株。多年来，人们还用各种技术来研究 自腐菌对木质纤维素的选择性降解，还建立起了一些有效的筛选方法。 and 解。Kirk Moore(1972)用化学测定木材组分的方法研究了木质素的选择性降解。 愈创木酚是一种木质素的模型底物，常常用来检测木质素降解活性。Nishida等人 为，能在愈创木酚为指示剂的愈创木酚培养基上产生变色圈的微生物具有降解木质素的 et 能力(Nishida 菌落外圈的直径(d2)的比值的大小可以作为判断判断白腐菌对木质纤维素素的降解选 择性的依据。根据这种特性可以将形成的变色圈分为两种：1．dl／d2l，说明该菌首先 andEriksson， 将解综纤维素；2．dl／d2l，则说明该菌能选择性降解木质素(Ander 1977)。 本实验中，我们用这种平板显色的方法筛选到选择性降解纤维素的白腐菌3株，选 择性降解木质素的白腐菌8株，还对环境条件对白腐菌降解选择性的影响进行了研究。 1．材料与方法 1．1菌株：实验室现有38株菌株，接种于麸皮汁培养基，28℃培养一周后接种。 琼脂 1．3菌株对木质纤维素降解选择性的判定 将菌种接种于平板培养基的中央，28℃培养。如果菌落在生长过程中会将愈创木酚 氧化为褐色的物质，在菌落中央形成显色圈，我们就认为该菌株具有氧化木质素的能力， 第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集 2007．07．15-18威海 变色圈直径越大说明菌株对木质素的降解能力越强；从第三天开始测定变色圈直径(d1) 和菌落外圈的直径(d2)，通过两者的比值判定菌株对木质纤维素的降解选择性，dl／d2l， 说明该菌首先将解综纤维素，dl／d2l，则说明该菌能选择性降解木质素。 1．4培养条件对菌株木质纤维素降解选择性的影响 (1)C源影响 改变木粉的含量观察碳源对菌种降解选择性的影响。木粉含量分别为：1％，2％， 3％，4％，5％。 在培养基中另外加入蔗糖、葡萄糖或纤维二糖等外加碳源，观察外