常见球菌红霉素耐药基因研究的论文.pdfVIP

常见球菌红霉素耐药基因研究 糜祖嬗’黄支密2秦玲1 (1无锡克隆遗传技术研究所．江苏无锡．214026；2解放军98医院．浙1Ⅱ湖州．313000) 【摘要】目的探讨常见球菌红霉素耐药基因存在状况。方法对常见细菌国内分离株 基因检出率较高，其中肺炎链球菌并可检出mefA基因。结论常见球菌国内分离株红霉素耐 药的常见机制为携带红霉素核糖体甲基化酶基因， 【关键词】球菌；红霉索；耐药基因 红霉素属大环内酯类抗生素，红霉素与细菌棱糖体的50S亚单位可逆性结合可阻碍敏感 resistance 菌的蛋白质合成”“。细菌可以通过产红霉索甲基化酶(erythromycinmethlylase)将 自身23SrRNA甲基化，从而减少红霉素与50S亚单位结合而耐药”】；细菌并可产转运蛋白将 红霉素泵出胞外而耐药”J；本文应用PcR技术检测常见球菌临r卡分离株的红霉索耐药相关的 报告如下： 1材料与方法 1．1细菌分离鉴定与药敏试验菌株鉴定为API．ATB自动做生物系统．药敏试验按美国 CommitteeforClinical 临床实验室标准化委员会(National Standards．NCCLS) Ltboratory 1999．2004年版进行。 u 1．2菌株DNA检测模板制备挑菌落置人内含50l裂解液(O．5％非离子去污剂配制的 浓度为200n 活10min。离心15000r／rain 30s。上清液即为基因扩增检测的锬皈液。 1．3红霉素耐药基因检测 1．3+lerm基因通用简并引物PCR检测从美国国立生物信息中心核酸数据库 (_www．ncbi．nlm．nih．gov)检索已登陆的ermA／BIC．／G／Q基因序列，自行设计elm基因通用简 并引物(引物序列为Pl 7．P25-AA (C／T)，TG(A／G)，TT(C／T)TT(C／T)，TrI，GT(A／G)，AA．3 7，其中I为脱氧次黄嘌 呤，目的产物长533 umol／L， bp)。优化后的反应体系为引物P1、P2各0．5umolFL，dNTPs各200 KCI S 2 9．0)10mmoFL，NP40 10mmot,L，(N地)2S04mmol／L，Mfgcl2 mmol／L，Tris·HCI(FH 性3mitt。然后按93℃1 30s，共35周期。 min一37℃2mia*72C1min GTA，CTA．AAC，CAA，ATA-3’，Pz ．364． 30s一55℃60s一72℃60s，共35周期。 1_3．3 检索已登陆的crmF基因序刿，自行设计ermF基因引物(引物序列为P15二～3，P25：-3’，目 30s 的产物长bp)。优化后的反应体系同上，热循环参数为：93C预变性2min，然后按93(2 一55℃30s．-．．-72℃60s，共35周期。 1．3．4 mefA基因PCR检测：按Hobart等文献报道Ⅱ1进行(引物序列为Pl5-ACT，ATC， 御盯．AAT，CAC，TAG，TGC一3’，P2 30s一55℃30s一72℃60s，共