不产桔霉素红曲诱变菌株的选育与色素发酵条件的研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四虎奎圊发酵工程学术计话套论文采 不产桔霉素红曲诱变菌株的选育及色素发酵条件的研究 产竹华，许赣荣 (扛南大学工业生物技术教育部重点宴驶室，扛苏无锯214036) 摘薹：；利用”Co对厚丰具有枯霉素生产能力的虹曲菌9908进行谤变，筛选得到一株不产 桔年素曲菌株．命名为9908A，实验室条件下32℃培养6d色价高干1300U／g。舟别采用 YES、MSG液态培养和固态培养方式，对该菌株是否产桔零素进行了详细的研究，结果发现 在这三种培养方武下，谈茁株均不产枯毒素。在实验室基础上对该菌株产色素固态发酵条 件进行了优化，优化齐件为装料量509、初始加水量60mL、拌料水的初始pH5．O、ZnSO。浓 度0．2％，优化后的色价维持在2000U／g左右。 前 言 红曲菌是我国的宝贵的遗产，以能产生大量天然色素和生理活性物质而著称，是目 前世界上用于工业化生产食用色素及功能性红曲最成功的范例。但自从法国人Blanc口] 发现桔霉素以来，桔霉索问题已引起红曲国内外研究者和生产者的极大关注。桔霉素是 一种生物毒素，对动物肾脏具有较强的毒性【”。 许赣荣等03对三十多株红曲菌产桔霉素的性能进行了普查，并检测了大量红曲产品 中，发现绝大多数都含有桔霉素含量。从食品安全的角度来说，不含桔霉素的红曲产品 应是我国红曲产业的发展方向。 色素、桔霉素都是红曲菌重要的聚酮体类代谢产物。法国研究者HajjajH等“1用同 位素示踪法初步阐明，红曲菌中桔霉索和色素的前体物是四酮体，二者在生物合成初期 阶段合成途径相同，但在进一步生成过程中，它们的合成途径有所不同，阻断桔霉素合成 途径就可能不产桔霉素，但保留色素的高产。 为得到高产色素并不产桔霉素的红曲菌种，可采用不同的育种方法。如基因工程技 术和常规的诱变育种。诱变育种是微生物菌种选育的经典方法，在社会上对转基因食品 安全性存在顾虑，并有排斥的情况下，常规的诱变育种方法也显示其独特的优势。事实 上．不同的红曲菌株产色素和桔霉素的能力有所不同，也是在长期的人工育种过程中，红 曲菌种遗传特性发生变化，桔霉素合成酶基因部分被破坏的结果。 我们通过对红曲菌诱变处理，筛选到不产桔霉素但高产色素性能得以保留的菌株。 对选育到的菌株，我们在易产桔霉素的培养基及优化的产色素培养基上进行红曲的发 酵，通过发酵条件的优化，证实诱变后的菌种在高产色素的情况下确实也不产桔霉素。 1材料与方法 1．1出发菌株 产竹华等；不产桔毒紊红曲诱变菌株的选育及色素发酵条件的研究 采用本实验室保藏的紫色红曲菌9908，适合于固态红曲米发酵。 1．2培养基及培养条件 土豆葡萄糖(PDA)培养基、MSG培养基、YES培养基[”} 种子培养基(g／L)：葡萄糖40，蛋白胨20，NaNOa2，MgSO。·7H。O1，KH：P04· 3HzO 5．5。 1，ZnSO‘0．02，pH t 固态发酵培养基：大米和小米(73)混合培养基。 1．3培养方法 往复式摇床，100r／min振荡培养48h左右。 (2)固态发酵培养方法：将种子液接入灭菌后的米饭中。将接种后的米饭堆积在瓶 的一角，32C培养，经1d左右，待大部分米饭上菌丝开始变色时，将米粒扣散摊平，培养 5d左右。 (3)液态发酵培养方法：在上述两种液态培养基接人红曲种子液，接种量8％。 180r／min、32℃培养5d左右。 1．4菌株诱变处理 斜面菌种经活化后，用无菌去离子水刮下菌体，稀释，通过镜检确定孢子浓度为106 —107／mL之间。”Co诱变处理：取稀释好的菌体每管5mL进行，整个处理过程中放置 在冰水浴中。分别用不同诱变剂量辐射1h。 1．5筛选方法 筛选过程参照《工业微生物实验技术手册》。 1．6诱变菌株产桔霉素性能鉴定 分别在YES、MSG液态以及固态培养，测定发酵液或红曲米的色价和桔霉紊含量。 1．7色价测定方法 1．8桔霉素测定方法 高效液相色谱法口]。 2结果与讨论 2．1 出发菌株红曲菌9908产色素桔霉索性能 本课题所采用的出发菌株为紫色红曲菌，本实验室编号9908，对其色素和桔霉