裸鼠成瘤实验注意事项.pptVIP

威斯腾生物技术中心 2014-9-1 裸鼠皮下成瘤 ---慢病毒感染后的细胞 裸鼠 无胸腺裸鼠（Nude Mouse，简称裸鼠）。目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。特别是在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面，它有着特殊的价值。 裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nn/+）各方面表现都正常。 小鼠中有若干突变基因，它可产生一种为无毛的表现型（phenotype），例如无胸腺裸鼠（Nude）、裸鼠（Naked）、无毛鼠（Hairless）、无鼻毛鼠（Rhinol），不要把这些突变鼠基因相互混淆。裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表现型，因此，不能将“裸鼠”与“无毛鼠”两词交换使用。 裸鼠 裸小鼠 裸大鼠 裸小鼠(基因符号nu): 无毛(hair less),无胸腺(athymus).幼鼠(3－4周龄),成年鼠(6－8周龄。 抵抗力差，易在SPF环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、 饮水患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，等都要求经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。 裸大鼠(基因符号rnu )： 一般特征似裸小鼠，但躯干部仍有稀少被毛并非象裸小鼠那样完全无毛，头部及四肢毛更多。裸大鼠易患呼吸道疾病。 形态特征 虽然说以裸大鼠代替裸小鼠，具有移植肿瘤大，取血量多，可行某些外科小手术等优点。因此比裸小鼠有一定优越性，其缺点是维持经费比裸SPF小鼠更高，另外裸大鼠目前不怎么流行。所以我们实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。 随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠。 裸鼠的选择 1.人体原发癌 我们实验室均采用细胞株作为材料，这个方式是 性价比最高的，操作简便，材料安全且容易获取。 结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤 、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织 肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百 分比（35.7%）的良好生长，并可传代。 裸鼠成瘤 2.建株的人体肿瘤组织培养细胞 裸鼠成瘤方式 理论上建株的肿瘤细胞均可以 细胞的选择大致有一下几个方面： 1.国际公认度较高的细胞株。 2.根据体内生长情况来确定，很多细胞株，在文献中有 很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名。? 细胞株的选择 当然，我们对于细胞株的选择是没有选择的！ 常规较容易成瘤的细胞： Hep-G2（肝癌，Hep2（喉癌），NCI-H460(大细胞肺)，A431(表皮癌),SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌），A375/B16-F10（人黑色素瘤细胞）。 可以成瘤但是比较慢的细胞： CNE（鼻咽癌），A549（肺癌），SPC-A-1（肺腺癌）。HT-29（结肠癌），EL-7402（肝癌）。 一些比较有争议的细胞： Hela（宫颈癌），HCT（人回盲肠癌细胞/人结直肠癌腺癌细胞）。 常见的细胞株 1、慢病毒保存 理论上慢病毒可在-80℃保存6个月，在4℃可保存3天。因为 慢病毒每次冻融会降低病毒滴度10%，因此慢病毒实验最好 是提前分装。 2、MOI值 细胞感染达到80%以上所需MOI值，这个大部分细胞是可以 查到，不过因为因为慢病毒感染细胞是很灵活的，因此MOI 值的选择也是很有差异性的，具体情况具体分析。 细胞慢病毒感染 附：慢病毒使用量的相关计算公式 MOI=（慢病毒使用的体积*慢病毒滴度）/ 需要感染的细胞数 其中：慢病毒使用体积单位为ml 慢病毒滴度单位为TU/ml 例如： Hep-G2细胞，MOI=20，慢病毒滴度=1.0*108 TU/ml, 24孔板的细胞总数：2.0*105个。 因此：感染24孔板中1孔的HEP-G2细胞所需要的慢病毒体积为： (20* 2.0*105)/ 1.0*108 =0.04ml 细胞慢病毒感染 附：一些细胞的慢病毒感染效果图 K562 A549 细胞慢病毒感染 细胞培养： 细胞的状态以及数量是裸鼠皮下成瘤很关键的一步。细胞状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会导致失败。即浪费了细胞，又错过了裸鼠成瘤的最佳时期 裸鼠成瘤 - + 裸鼠成瘤 细胞接种