非经典型自噬替代经典型自噬影响单核巨噬细胞分化的研究.pdfVIP

1 第 26 卷 第 4 期 4 论 著 7 月 Canonical autophagy can 非经典型自噬替代 be replaced by alternative 经典型自噬影响单 autophagy in monocyte- 核-巨噬细胞分化 macrophage differentiation 的研究 蔡金洋 CAI Jin-yang （苏州大学唐仲英血液学研究中心， (Cyrus Tang Hematology Center, Soochow University, 江苏 苏州 215123） Suzhou 215123, Jiangsu, China) 【摘要】目的：研究经典型自噬缺失时，非经典型自噬是否在小鼠单核-巨噬细胞分化中起作用。方法：将Atg7flox/flox小鼠与 Lyz-Cre小鼠杂交获得单核巨噬细胞自噬特异性敲除的小鼠模型Atg7f/f；Lyz-Cre小鼠，使用C57BL/6小鼠作为对照组。应用磁珠分 选的方法富集单核细胞并加因子诱导分化，流式细胞术检测单核-巨噬分化比例(Ly6C-F4/80)及细胞凋亡比例；实时荧光定量 PCR方法检测非经典型自噬关键基因 Vps34，Beclin1和ULK1 mRNA表达水平；Western Blot方法检测Vps34，beclin1，ULK1以及非 经典型自噬关键蛋白Rab9的蛋白表达水平；使用非经典型自噬抑制剂Brefeldin A(BFA)处理单核细胞，流式细胞术检测单核-巨噬 分化比例；使用共聚焦显微镜及电镜观察自噬情况。结果：与野生型小鼠相比，Atg7f/f；Lyz-Cre小鼠单核-巨噬细胞分化能力明 显降低，凋亡比率显著上升(P均0.05)。共聚焦及电镜结果显示Atg7f/f；Lyz-Cre小鼠经典型自噬被破坏，但仍存在自噬响应。而 非 经 典 型 自 噬 关 键 因 子 Vps34，Beclin1，ULK1及 Rab9蛋 白 表 达 水 平 均 上 调 (P均 0.05)。 非 经 典 型 自 噬 抑 制 剂 BFA能 抑 制 Atg7f/f；Lyz-Cre小鼠单核-巨噬分化但不影响野生型小鼠。结论：经典型自噬对小鼠单核-巨噬细胞分化起重要作用，而当其被破 坏时，非经典型自噬活性上调以维持单核-巨噬细胞分化。 【关键词】单核-巨噬细胞；经典型自噬；非经典型自噬；细胞分化 中图分类号：Q254 文献标志码：A 文章编号： 1004-616X(2014)04-0241-07 doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2014.04.001 【ABSTRACT 】 OBJECTIVE: To study the effects of alternative autophagy on monocyte-macrophage differentiation in the absence of canonical autophagy. METHODS：Atg7flox/flox mice were crossed with