不同数量神经干细胞移植治疗实验性脑梗死效果研究的论文.pdfVIP

21世纪神经科学新进展大会 The2 inNeuroscienceConference 1“CenturvProgress 不同数量神经干细胞移植治疗实验性脑梗死效果研究 天津市环湖医院 王新平王世民 谷芙蓉张文志秦进喜陈宁曾宪珠 【摘要】目的研究大鼠实验性脑梗死后移植神经干细胞(NSCs)的治疗效果．并寻找 能有效促进功能恢复的最小移植数量。方法体外分离、培养大鼠胚胎脑神经干细胞，建立大鼠大 脑巾动脉梗死(MCAO)模型．实验动物分为5组，在大鼠脑梗死(MCAO)后7天分别移植中、 低、高数量的NSCs，并设假移植组，假手术组对照。评价移植后3个月中各组动物的行为学变化， 3个月后处死行组织学检查。结果NSCs移植后能在宿主脑内存活，并可分化为神经元和胶质细胞 为学评分与假移植组和假手术组相比均有显著性升高。证明移植低、中、高数量的NSCs均能改 善因脑梗死造成的功能障碍。(2)移植组I与移植组Ⅱ比较：o0．Ol，差异显著，说明低数量与 中数量移植组间行为学功能改善情况有显著差异，中数量组效果较好；(3)移植组I与移植组Ⅲ 比较：P0．05，无差异说明高数量与中数量移植组行为学功能改善情况没有明显差异；结论NSCs 移植可促进MCAO后大鼠神经功能恢复：移植不同数量NSCs行为学功能改善情况有显著差异，中 等数量移植可以较少的数量发挥较好的移植效果。 【关键词】脑梗死神经十细胞移植 脑血管病是导致人类死亡的三大疾病之一，其中75％的患者为脑梗死。目前治疗此类疾病 的手段和效果都不令人满意，主要原因就是中枢神经系统的再生能力有限，损伤后难以自我重建。 本实验采取神经干细胞移植的方法，促进动物神经功能恢复，并且分别进行了低、中、高i种数量 的NSCs移植，以期筛选出能促进神经功能恢复的最小移植数量。 材料与方法 一、NSCs培养 Wistar孕鼠，无菌条件下剪开子宫，取出大脑，剪碎脑组织，经不锈钢网分散细胞，接 种于培养瓶中培养。在移植前用5一溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记NSCs培养物。所用试剂为美 国GIBCo及Si91na公司产品。 二、MCAO模型制作及评分 1、动物：Wistar雌性成年大鼠，体重280—320．(1。分组情况： 移植组In=10 NSC MCAO后l周移植8×105 NSC 移植组Ⅱn=10MCAO后l周移植6×105 X 106NSC 移植组Ⅲn=lOMCAO后l周移植l 假移植组n=lOMCAO后l周移植生理盐水 NSC 假手术组n=lO假手术后1周移植8×105 2、操作步骤： 采用线栓法制作MCAO模型。线栓后对动物进行MRI检查。假手术组未插入线拴，其余 操作同上。 3、MCAO后瘫痪程度评定： 参考Longa及Bederson的方法进行评分。 三、干细胞移植 将鼠麻醉后置于立体定向仪上，钻开头部，插入微透析针，将用BrdU标记过的干细胞混 入0．6ml生理盐水中．微泵推进速度约为0．5斗l／min，拔出微透析针。缝合皮肤。 ～139— 21世纪神经科学新进展大会 The2 Conference inNeuroscience 1“CenturyProgress 四、神经功能缺失评定 l、抓握牵引实验一一评价肌肉的力度和动物的平衡能力。 2、斜板实验—．评价鼠的平衡能力。 五、组织学检查： MCAO模型鼠NSCs移植3个月后处死行病理学检查。 1、光镜检查： Brdu阳性细胞个数。 2、透射电镜检查： 以JEO