长白山有机灵芝提取物对实验小鼠T、B淋巴系统免疫调节功能研究.pdfVIP

长白山有机灵芝提取物对实验小鼠T、 B淋巴系统免疫调节功能的研究 金龙哲· 柳林 王鑫 郭春沅·· (吉林省延边特产研究所延吉133001) 摘要：选用昆明种小鼠为实验对象，随即分成实验组和对照组。实验组分别按0．02、 O．2、0．69／kg．BW．d灌胃长白山有机灵芝提取物，对照各组以蒸馏水灌胃 ‘胞检测及ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验。结果表明：经口给予小鼠不同剂量的长 白山有机灵芝提取物30天，能增强小鼠迟发型变态反应，能提高ConA诱导的小鼠淋 巴细胞转化能力，能提高小鼠的半数溶血值和抗体生成细胞数。 关键词：有机灵芝提取物、免疫调节 灵芝(Ganodermalucidum)为多孔蕴科灵芝属大型药用真菌，现代药理学研究证 明灵芝对特异及非特异性免疫系统都具有显著的调节作用。长白山有机灵芝是在长白山 eX Fr．)Krast]，本研究利用长白山有机灵芝提取物对实验小鼠的T、B淋巴系统进行了免疫 调节功能试验。 材料与方法 1．1样品：长白山有机灵芝提取物，为褐色粉末，由延边特产研究所生物技术研 究室提取。 1．2实验动物：吉林大学基础医学院动物实验中心提供的昆明种雄性小鼠，合格 组12只，作为免疫一组，进行迟发型变态反应、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生 成细胞检测；选健康雌性小鼠48只，体重18—229，分为4组，每组12只，作为免疫 二组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验。 197 馏水稀释。以蒸馏水作为阴性对照组，各组小鼠灌胃量均为0．2mL／109．BW．d，连续灌 胃30天后测定各项免疫指标。 1．4仪器与试剂： 电子天平(O．19)、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722分光光 度计、恒温水浴、酶标仪、显微镜等。 24孔和96孔平板细胞培养板、玻璃器皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、 血色素吸管、载玻片等。 mol／L的HC[溶液、酸性异 小牛血清、青链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、1％冰醋酸、1 丙醇(96 加蒸馏水至1000mL)等。 1．5实验方法： 1．5．1迟发型变态反应(足跖增厚法DTH) · 取羊血，生理盐水洗涤3次，小鼠用2％(V／V)SRBC腹腔免疫，每只鼠注射O．2 mE(约 同一部位测量三次，取平均值。 1．5．2 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法) 无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank，s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成 然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％ 以上)，调整细胞浓度为3×106个／mL。再将每一份细胞悬液分两孑L加入24孔培养板 中，每孔1mL，--孑LN 养4小时。培养结束后，每孔加入ImL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。 r～’ 然后将溶解液直接移入2 1．5．3抗体生成细胞检测(Jeme改良玻片法) 绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤 维，放入4C冰箱保存备用，可保存2周。 将压积SRBC用生理盐水配成2％(V／V)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0．2mL。 将于用SRBC免疫卜5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取脾，，放入盛有Hank，s液的小平 皿中，轻轻将脾磨碎，制成细胞悬液，然后经4块纱布过滤，用Hank，s液洗2次，每 mLRPMll640培养液中计数细胞， 次离心10min(1000r／min)，最后将脾细胞悬液浮在5 并将细胞浓度调整为5×106个／mL。 Hank，s液混