大孔吸附树脂分离富集苜蓿皂甙研究.pdfVIP

中草药及天然产物资源开发与保护相关技术研讨会 大孑L吸附树脂分离富集苜蓿皂甙的研究 古燕翔 延庆县植物保护站，北京102100 [摘要】 以苜蓿皂甙的吸附量和解吸率为指标，大范围筛选树脂，结果表明X-5树脂具 有较好的吸附性能和解吸效果。通过正交实验及方差分析优化大孔吸附树脂分离纯化苜蓿皂甙的工 艺条件。确定了苜蓿皂甙分离富集的最佳操作条件为：上样浓度8rag／ml，色谱柱的径高比1：7， 药材一树脂比例1：3：吸附完全后，先以水洗脱，除去杂质，再以5096乙醇洗脱，可以得到纯度较 好的苜蓿皂甙，此工艺具有良好的产业化前景． 【关键词J：苜蓿皂甙；分离富集；X-5大孔吸附树脂 sativa三)因其营养价值高而被誉为“牧草之王”。人类很早就有利用苜 紫花苜蓿(Medicago 蓿的历史。其食用和药用价值自我国明代的《本草纲目》就有详尽的记载。苜蓿属植物根、茎、叶、 种子等部分都含有较高的皂甙含量，而皂甙类化合物是近年来研究的热点。大量的研究表明¨_1，苜 蓿皂甙具有多种多样的药理活性和生物活性，如可抑制胆同醇在肠道的吸收，降低血浆胆同醇，防 治心脑血管疾病、降压、抗菌、消炎、减热、镇静、强壮等方面的药理作用，而且还可以作为食品 的天然甜味剂、保护剂、发泡剂、增味剂和抗氧化剂等。苜蓿皂甙毒性低、药源多，对降血脂及治 疗冠心病具有很大的价值。 传统的醇同流正丁醇萃取方法提取苜蓿总皂甙，提取时间长，溶剂用量大，成品纯度低，因此， 寻找提高苜蓿皂甙提取率的新方法，新工艺是目前苜蓿深加上工艺和规模化提取急需解决的问题。 近年来，大孔吸附树脂广泛应用于天然产物的分离纯化13一一1，其具有良好的物理化学稳定性、吸附 选择性、以及解吸条件温和，经济实用等特点。目前朱见有关大孔吸附树脂在分离纯化苜蓿皂甙方 面的报道。本文以紫花苜蓿为原料对苜蓿皂甙的提纯工艺进行了研究。 1材料与方法 1．1材料与仪器 材料：紫花苜蓿品种为W323，采自北京沙河中国农业大学实验基地；大孔树脂(NKA一9， 于北京市药品生物检定所(纯度95％)；无水乙醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸和甲醇均为国产分析纯。 仪器：752可见分光光度计、旋转蒸发器(BI[jCHI)、电热恒温水浴锅、电子天平、小型真空泵、 抽滤瓶。 1．2大孑L吸附树脂的预处理 在吸附柱内加入相当于装填树脂体积0．4-．+0．5倍的乙醇，然后将新树脂各自投入吸附柱中。 使其液面高于树脂约0．3cm处，浸泡24h，充分溶胀。然后用2BV／h(树脂床体积，Bedvolume，BY) 乙醇淋洗树脂，至流出液加入少餐蒸馏水后不早白色混浊为止。并用蒸馏水以同样的流速洗净乙醇。 4h，最后用蒸馏水以同样流速洗至出水pH值星中性。留一部分树脂保存在柱中备用，另外取一部 分过滤，室温晾干备用。 1．3苜蓿皂甙提取液的制备 80℃的水浴锅中加热2小时，同流提取一次，过滤后将滤液浓缩成千浸膏，用50ml水将浸膏溶解， 然后用等体积的彳i油醚和止J‘醇分别萃取二次、三次，然后将止j’醇萃取液合并浓缩，用水溶解并 定容在50ml的容鼙瓶中，备用。 1．4紫外分光光度法测定苜蓿皂甙的含量旧 m1容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，备用。分别吸取 精密称取齐墩果酸对照品10．02mg，置10 对照品溶液40、50、60、70、80、90Ill置10mL具塞试管中，水浴蒸干，待冷却后分别加入5％ 45 中草药及天然产物资源开发与保护相关技术研讨会 的香草醛—冰醋酸溶液0．2ml，振摇溶解后加入高氯酸0．8ml，摇匀后置于70℃水浴中加热15min， 然后流水冷却，再各加入冰醋酸5m1，充分振摇静止lOmin后于545nm处测定吸光度，得到回归方 程：y=51．85127 线性关系良好。在同样条件下，测定样晶吸光值，根据回归方程计算苜蓿总皂甙的含量。 2 结果与讨论 2．1大孔吸附树脂选择 置于50ml具塞三角瓶中，分别加入20ml苜蓿提取液(浓度为4