小鼠钙网蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备.pdfVIP

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小鼠钙网蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备.pdf

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小鼠钙网蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备.pdf

2011 31 4 291 汪龚泽, 刘朝奇, 杨建林, 聂纪芹 ( , 443002) : ( calreticulin, CRT) , , PCR CRT , PET-28a( + ) , CRT CRT BALB/ c , CRT West ern blot ELISA: CRT ; Western blot CRT , CRT CRT , , CRT : ; ; : R392. 11 : A : 1001-2478(2011) 04-0291-05 ( calreticulin, CRT ) Invitrogen Sigma Sigma 2+ Ca , , CRT ( : EPICS XL-4, Beckman Coulte ) , , BALB/ c 1. 2 1. 2. 1pET 28a( + )-CRT 截短基因重组质粒的构建 cDNA , [ 1~ 3] PCR CRT NP CRT EcoR I / Xho I [ 1] CRT , PET 28a( + ) EcoR I / Xho I , CRT 16 NP , 10 l DH5a , CRT, , CRT LB 37 , 1. 5 ml LB 37 , 1 220 g , 1. 1T4 1. 2. 2 pET 28a( + )-CRT 截短基因原核表达与鉴 TaqDNA Fermentas 定pET 28a( + )-CRT E. coli DH5E. coli BL21 ( DE3) His BL21( DE3) , IPTG ( 1. 0 pET28a( + ) H IS mmol/ L) , 2 , HRP IgG SDS , 100 3 min, 4 FIT C IgG min, ( 12 000g ) 1 min, 20 l Protein tech Group RPM I 1640 SDS- PAGE , Western blot : 2010-11-19; : 2011- 03-10 [ 4] : ( 2008CDB118) pET28a( + )- CRT , SDS-PA GE : ( 1986- ) , , , 5% ; HIS : ( 0717- 6397179; E-mail: zqliu@ ctgu. e u . cn) ( 1 2 000) 2 h; 292 2011 31 4 TBST 3 , 5 min; HRP 1. 2. 7 流式细胞术检测CRT 抗体的特异性