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DNA甲基化对核小体结构的影响 报告人：沈伟 2013.10.9 DNA Methylation Increases Nucleosome Compaction and Rigidity John S. Choy,Sijie Wei,Ju Yeon Lee,Song Tan,Steven Chu,and Tae-Hee Lee* Department of Chemistry, The Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania 16802, United States J. AM. CHEM. SOC.VOL. 132, NO. 6, 2010 Effects of DNA Methylation on the Structure of Nucleosomes Ju Yeon Lee and Tae-Hee Lee* Department of Physics, Bio-X Program, Stanford UniVersity, Stanford, California 94305, and Department of Chemistry and Department of Biochemistry Molecular Biology, The PennsylVania State UniVersity, UniVersity Park, PennsylVania 16802 J. Am. Chem.Soc. 2012, 134, 173?175 核小体： DNA甲基化有什么用？ 同卵双胞胎也有不同 性状不全是由碱基的顺序决定 基因转录以染色质的解螺旋为前提 表观遗传 CPG岛----启动子 CpG甲基化----核小体的结构 了解基因表达 新药开发治疗CpG甲基化有关的疾病 ATTENTION: 癌症共同特征之一： 启动子区甲基化-抑癌基因失活 启动子附近的甲基化CpG岛可防止转录酶结合 转录抑制因子结合甲基化的CpG岛,即通过蛋白的作用致使染色质交联从而阻止转录 另外由于DNA和组蛋白结合在一起，还可能是甲基化改变了核小体的结构 anyway，并不否认前两种假设存在 我们关心的： 可否证实第三种假设属实呢？----怎么检测？ 单分子荧光共振能量转移技术 单分子检测更加直观，全面，精确 (fuorescence resonance energy transfer,FRET) SM FRET measurements 主要检测什么？ 荧光共振能量转移效率理论公式 测得不同的FRET效率 ↓ 代表不同的DNA实际两端距离 ↓ 表示DNA不同的缠绕方式 ↓ 不同的核小体结构 单分子的构建 FRET检测结果 DNA甲基化如何影响核小体结构？ DNA与组蛋白作用的强弱 强则DNA短，结构封闭 弱则DNA长，结构松散 除了FRET效率支持这个解释， 荧光的各向异性也可以解释 进一步的，该课题组做了更深入的研究发现 CpG基甲基化 DNA紧密包裹组蛋白核心拓扑结构的变化。 两种不同的核小体构建 conclusion CpG甲基化对核小体的结构的以下影响： DNA更紧密的缠绕组蛋白，刚性增加 拓扑结构的变化，DNA缠绕增多 两者都有利于形成抑制性（不活跃的）的染色质结构，抑制基因表达 首创性 单分子检测 QUESTION 为何没有直接观测核小体结构变化？ 能否定量？ 谢谢！ * * JACS H2A H2B H3 H4 200碱基对的DNA 甲基化如何影响性状？ Single molecule fluroescence intensities were taken with a sensitive CCD camera (iXon+897, Andor Technology, Belfast UK) in a prism coupled total internal reflection (TIR) geometry based on a commercial microscope (TE2000, Nikon, Tokyo Japan) with modifications. The excitation is perpendicularly polarized along the TIR incidence. Imaging was do