影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤南方医科大学.pptVIP

影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤 南方医科大学 医学基础实验教学中心 一、实验目的 1.强化颈动、静脉，输尿管插管技术和家兔肾缺血再灌注损伤模型的复制方法； 2.加深理解尿生成的机理及肾排泄功能的重要意义 ； 3.了解缺血再灌注损伤的机制及其基本实验方法。 二、理 论 基 础 二、理 论 基 础 三、实 验 步 骤 四、注 意 事 项 确切、可靠的输尿管插管，是实验成功的关键 随时注意输尿管插管是否通畅，勿扭曲，内侧管口勿触壁 如图分离左肾A。腹部正中切口10cm，切开前先从背部用手触及肾脏定位，术中勿伤及肾V，勿牵拉触碰肾脏 试管刷洗干净，下周上课时上交论文（共用实验数据） * * * * * * （一）尿的生成过程 （二）影响因素 实验设计 1.肾小球的滤过作用 形成原尿,125ml/min,180L/d 2.肾小管与集合管的重吸收作用 形成终尿,原尿中99％的水约被重吸收 ,1.5-2.5L/d 1. 影响原尿形成的因素 （1）滤过膜的面积和通透性 （2）有效滤过压 　　 肾小球毛细血管压 　　 血浆胶体渗透压 　　 肾小囊内压 2. 影响终尿形成的因素 （1）小管液中溶质的浓度 （2）影响肾小管上皮细胞重吸收作用的体液因子和药物 垂体后叶素(加压素）：↑对水的通透性， ↑重吸收 醛固酮: ↑钠离子的主动重吸收， ↑重吸收 iv-NS iv-20%葡萄糖 速尿 ↓ ↑ 中性粒细胞 细胞损伤 缺 血 再灌注 致炎因子↑ 氧自由基↑ 无复流 缺血一再灌注损伤的主要发病机制 钙超载 细胞坏死 －夹闭左肾A 30min 缺血损伤恢复 －恢复血流30min O2 Ca2+ 尿Cr测定方法 取样 取尿液10μl与2ml蒸馏水按1：200比例稀释 加样 测定 37℃ 10min水浴，以蒸馏水调零， 测510 nm处光密度 计算 手术：麻醉→右颈V插管→左颈A插管→补液30ml，观察血压→左输尿管插管 观察尿量( ml/5-10min），取尿0.5ml测Cr 2.肾缺血再灌注损伤 0.5 0.5 0.5 试剂四 0.5 0.5 0.5 试剂三 1.6 蒸馏水 1.6 试剂一(Cr标准品) 1.6 测试样品上清 空白管 测定管 标准管 加样（ml） 肌酐(mmol/L) = x 标准品浓度 x 201倍 (Cr标准品浓度：10 mmol/L) 测定管OD - 空白管OD 标准管OD – 空白管OD 计算内生肌酐清除率(Ccr) （血肌酐浓度由老师提供，正常：152.3umol/L; 30min:175.6umol/L） Ccr = x 尿量(ml/min) 尿肌酐浓度 血肌酐浓度 iv. NS 30ml,观察尿量( ml/5-10min),测Cr iv. 20%GS10ml，观察尿量( ml/5-10min),测Cr 1.尿的生成过程 游离左肾动脉,夹闭20min 松开动脉夹，记录15min尿量，若有尿，第二次取尿0.5ml测Cr 1.Iv NS 50ml(1-7组) 2.iv NS 49ml+速尿1ml(8-14组) 3.iv NS 40ml+ 20%GS 10ml （≥15组） ↓ ↓ ↓ 观察15min，记录尿量，未取得第二次尿的组取尿0.5ml测Cr 分组 ↓ 若无尿 若无尿 * * *