分子生物学基础 教学课件 作者 臧晋蔡庄红 主编 杨百梅 主审 第四章.pptVIP

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尚辅网 尚辅网 分子生物学基础 第四章 遗传信息的转录—从DNA到RNA 第一节 RNA转录的概述 一、RNA转录的特点 在DNA指导下RNA的合成称为转录。RNA链的转录起始于DNA模板的一个特定起点,并在特定的终点终止,此转录区域称为转录单位。一个转录单位可以是一个基因或多个基因。基因的转录是一种有选择性的过程,随着细胞的不同生长发育阶段和细胞内外条件的改变将转录不同的基因。转录起始主要由DNA分子上的启动子(promoter)控制,而控制终止的部位称为终止子(teminator)。典型的转录单位结构如图4-1。 第一节 RNA转录的概述 第一节 RNA转录的概述 二、转录的基本过程 无论是原核还是真核细胞,转录的基本过程都包括:模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止(图4-2)。 第一节 RNA转录的概述 1.模板识别 模板识别阶段主要指RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合的过程。转录起始前,启动子附近的DNA链分开形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA的碱基配对。转录起始就是RNA链上第一个磷酸二脂键的产生。 2.转录起始 转录的起始从化学过程来看是单个核苷酸与开链启动子–酶复合物相结合构成新生RNA的5′端,再以磷酸二酯键的形式与第二个核苷酸相结合,起始的终止反应在σ因子的释放。过去认为磷酸二酯键的形式就是转录起始的终止,实际上,只有当新生RNA链达到6~9个核苷酸时才能形成稳定的酶–DNA–RNA三元复合物,才释放σ因子,转录进入延伸期。 第一节 RNA转录的概述 3.通过启动子 转录起始后直到形成9个核苷酸短链是通过启动子阶段,此时RNA聚合酶一直处于启动子区,新生的RNA链与DNA模板链的结合不够牢固,很容易从DNA链上掉下来并导致转录重新开始。一旦RNA聚合酶成功地合成9个以上核苷酸并离开启动子区,转录就进入正常的延伸阶段。所以,通过启动子的时间代表一个启动子的强弱。 4.转录延伸 RNA聚酶离开启动子,沿DNA链移动并使新生RNA链不断伸长的过程就是转录的延伸。大肠杆菌RNA聚合酶的活性一般为每秒合成50-90个核苷酸。随着RNA聚合酶的移动,DNA双螺旋持续解开,暴露出新的单链DNA模板,新生RNA链的3末端不断延伸,在解链区形成RNA–DNA杂合物。而在解链区的后面,DNA模板链与其原先配对的非模板链重新结合成为双螺旋。 5.转录终止 当RNA链延伸到转录终止位点时,RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键,RNA–DNA杂合物分离,转录泡瓦解,DNA恢复成双链状态,而RNA聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来,这就是转录的终止。 第一节 RNA转录的概述 三、RNA聚合酶 1.原核生物的RNA聚合酶 大多数原核生物RNA聚合酶的组成是相同的(表4-1),大肠杆菌RNA聚合酶由2个α亚基、一个β亚基、一个β′亚基和一个ω亚基组成,称为核心酶。加上一个σ亚基后则成为聚合全酶(holoenzyme),相对分子质量为4.65×105(图4-3)。 第一节 RNA转录的概述 2.真核生物的RNA聚合酶 真核生物的基因组比原核生物大,RNA聚合酶也更为复杂。其相对分子质量大都在5×105左右,有8~14个亚基,并含有Zn2+。利用α-鹅膏蕈碱(α-amanitine)的抑制作用可将真核生物RNA聚合酶为分三类(表4-2)。 第二节 启动子与转录的起始 一、启动子的基本结构 启动子是一段位于结构基因5′端上游区的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。因为基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物,所以,RNA聚合酶如何有效地找到启动子并与之相结是转录起始过程中首先要解决的问题。有实验表明,对许多启动子来说,RNA聚合酶与之相结合的速率至少比布朗运动中的随机碰撞高100倍。 第二节 启动子与转录的起始 1.原核生物的启动子结构 原核生物启动子序列按功能的不同可分为3个部位(图4-4上)。 (1)起始部位:指DNA分子上开始转录的作用位点,该位点有与转录生成RNA链的第一个核苷酸互补的碱基,由前述内容可知,该碱基的序号为+1。 (2)结合部位:是DNA分子上与RNA聚合酶的核心酶结合的部位,其长度为7bp,中心部位在–10bp处,碱基序列具有高度何守性,富含TATAAT

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