DNA实验设计方案玉米基因组DNA的提取与转基因成分分析.docVIP

《生化实验技术》实验设计方案 实验项目：玉米基因组DNA的提取与1、掌握提取DNA的基本方法、 4、学习水平式琼脂糖凝胶电泳。、掌握高速冷冻离心机、微量移液枪、水平电泳仪等仪器设备的使用。核酸是生物有机物体重的重要组成成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起。核酸分为DNA和RNA两大类，前者主要存在于细胞核内，后者要存在于细胞质及核仁里。在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。苯酚可使蛋白质变性，蛋白质溶于酚相，DNA则溶于上层水相。将氯仿与苯酚混合使用，可减少酚相中因水的存在而造成DNA的少量溶解。95%乙醇可使核酸从水相中沉淀出来，用70%的乙醇洗涤可以除一些盐分，经Rnase解RNA，可得较纯的DNA。DNA含量与纯度测定，目前常用紫外吸收法，利用核酸在260nm有吸收峰，根据公式DNA(μg/mL)=A260*50*稀释倍数可计算出核酸DNA的浓度。由于蛋白质在280nm有吸收峰，可根据比值判断DNA纯度：A260／A280＜1.8时，表明蛋白质含量偏高；＜A260／A280＜1.9时，表明样品较纯；A260／A280＞2.0时，表明RNA或DNA碎片较多。 ’-脱氧核糖在酸性环境中成为w-羟基-r-酮基戊醛，此物与二苯胺反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。DNA在40-400ug范围内光吸收值与DNA含量成正比。 在转基因技术中，外源基因