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《基因工程》课程实验指导书 生物技术专业 黄淑坚 黄良宗 编写 佛山科学技术学院 2005年12月  目 录 前 言 Ⅱ 实验一 反转录－聚合酶链式反应（RT-PCR） 1 实验二 DNA目的片段的回收与DNA的体外连接 7 实验三 重组DNA的转化 10 实验四 重组DNA的鉴定 13 实验五 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 16 实验六 表达产物的检测与分析——SDS 18 附录 22 参考文献 34 前 言 基因工程学是以生物化学、分子生物学和分子遗传学等学科为基础而发展起来的一门新兴技术学科，自DNA重组技术于1972年诞生以来，作为现代生物技术核心的基因工程技术得到飞速的发展、、、、、PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下,以目的DNA为模板进行合成由这三个基本步骤组成轮循环。PCR反应中的主要成份　　1. 引物：PCR反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物的好坏往往是PCR成败的关键。