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- 2017-08-20 发布于重庆
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实验课学案.doc
课程名称：生物化学检验技术
项 目：血清中总胆固醇的测定
设 计 人：袁丽丽
学习目标：
1、掌握提取血清中总胆固醇的方法
2、准确吸取上清液
3、掌握剧烈震荡发生显色反应的方法
4、了解血清中总胆固醇含量的正常范围及临床意义
学习重点：
1、上清液的吸取方法
2、掌握剧烈震荡发生显色反应的方法
3、测定血清中总胆固醇的临床意义
学习过程：
一、原理的学习：
1、用无水乙醇沉淀血清中蛋白质，提取胆固醇。
2、在高热环境中硫磷铁试剂中Fe3+与胆固醇结合形成稳定的殷红色化合物
二、实验步骤：
1、胆固醇的提取：
取一支小试管，加入0.1ml血清，取4.9ml无水乙醇将血清冲成颗粒状悬浮液，玻璃纸盖住试管口，颠倒混合数次，脱脂棉塞住管口，放在试管架上静止10分钟。
2、离心：
2000转/分离心5分钟，离心前要注意配平。
3、加样：
取两支中试管，一支标记As，另一支标记Au。As管表示标准液管，Au管表示被测样试管。按下表加样：
加入试剂 Au As 上清液（ml） 2.0 — 胆固醇标准液（ml） — 2.0 硫磷铁试剂（ml） 2.0 2.0 4、显色：
将两支试管拿在手中，剧烈震荡，使瞬时温度产生大于80℃，10-20次即可，静止10-20分钟，待其温度降至室温比色。
5、比色：
波长：550nm，比色杯光径：1cm，蒸馏水调零
三、计算公式：
被测血清中总胆固醇
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