超敏ECL化学发光液.docVIP

超敏ECL液 Super ECL Reagent Cat.No..M2301 Size: 50 ml 描述：海基超敏ECL液用于Western、Northern和Southern blot分子杂交的化学发光检测，比传统化学显色法灵敏度高，可达pg水平。原理是采用新型发光底物（Luminol），其与辣根过氧化物酶反应时产生很强的发光信号，在暗室中对X-光片感光，以此检测微量蛋白而获得理想的实验结果。海基增强型ECL发光液具有灵敏度高，持续时间长等特点。 组分 组分 数量 Super ECL A 25 ml Super ECL B 25 ml 应用 在Western 印迹分析，核酸杂交以及EMSA 实验中，HRP 标记的二抗或探针与靶分子结合再与底物反应产生可见光。 储存：2-8°C，Super ECL A要求避光保存。 操作方法（以Western Blot为例) 1．按每平方厘米膜面积用0.1-0.2 ml配置发光液：根据发光液的需要量，取等体积A液和B液，混匀后避光保存备用；该发光液必须现配现用。 2. 取出膜，平放在干净的保鲜膜上，膜的正面（蛋白质面）朝上，在膜的中央加适量的配置好的发光液（6×8 cm的膜加2 ml发光液），溶液向四周迅速扩散，覆盖所有膜面。室温保温5分钟左右，在此过程中请仔细观察信号的出现。注意：如果信号强，在暗中能很快看到阳性信号出现。 3. 待信号出现且稳定后，用镊子夹起膜，除去多余的发光液，平放在干净的保鲜膜上，膜的正面（蛋白质面）朝上，在转移膜的上面再覆盖一层保鲜膜，除去保鲜膜与转移膜之间的空气泡，请务必保证保鲜膜是干净的，不被其他杂物或液体污染。 4. 在暗室中，将膜的正面对着X-光片，放入暗盒。第一次曝光时间在1分钟左右(有经验的操作者可以根据信号的强超 Su C 弱自行决定)，立即按要求对X-光片进行显影和定影，确定最佳曝光时间。曝光时间从数秒到数小时不等；特别弱的过夜曝光也可。 注意 VDF膜较硝酸纤维膜能更好的结合蛋白，因此呈现较强的信号。选高质量的PVDF膜；尽可能不用Nylon膜。 .与抗体结合以后，要保证膜处于湿润状态，否则会导致背景较高。 .没有信号的原因：有些抗体不识别变性抗原，有时需要考虑电泳过程对蛋白质结构的影响；样品中无待测蛋白质或含量过低；一抗效价低，用量少，可适当增加一抗的用量； .背景过高原因：转移膜封闭不充分；与抗体孵育后洗涤不彻底；膜在处理过程中过干；二抗用量过多等。 .注意及时更换显影液、定影液。