利用原生质体融合选育苯环化合物降解菌株研究.pdfVIP

利用原生质体融合选育苯环化合物降解菌株的研究 范长胜1李蜜2韦俊宏1刘强2 (1．复旦大学生命科学学院，上海；2．上海大学环境与化学工程学院，上海200433) 原生质体融合是一种重要的微生物育种技术。微生物原生质体融合育种技术 不但可以改良菌种遗传性状、提高代谢产物量，还可以综合不同菌株代谢特征， 产生新的有用代谢产物。与小范围局部的基因重组方式相比较，原生质体融合具 有广泛适用性和随机性，能够打破菌株的种属乔限，实现远缘菌株间的多细胞融 合；还可以和其他育种方法相结合，获得亲本菌种的多种优良性状。原生质体融 合在工业生产和遗传育种上展示出广阔的应用前景。 本实验运用原生质体融合技术将恶臭假单胞菌与枯草芽孢杆菌融合。恶臭假 单胞菌是污水处理中常见的革兰氏染色阴性菌；枯草芽孢杆菌是生存能力强生态 适应范围广的革兰氏染色阳性菌。我们使用抗生素作为选择标记，溶菌酶制各原 生质体，聚乙二醇促使融合，最终获得了兼有多重亲本遗传标记的能够降解苯甲 酸和苯酚的融合菌株。我们对其中的融合子F29菌株特性进行了研究。获得主要 结果有(1)融合子F29的菌落形态不同于两种亲本菌株；早期培养的菌体形态 与枯草芽孢杆菌相似，革兰氏染色阳性。(2)扩增性16SrDNA限制性酶切图谱 rDNA限制性酶切图谱与恶臭假单胞菌 分析(ARDRA)i正实：融合菌株F29的16S rDNA核 ASI．1130的图谱极为相似，而与枯草芽孢杆菌B25的图谱大不同。16S 酸测序证明：融合菌株F29的16SrDNA序列与恶臭假单胞菌ASI．1130的一致 性达到99．3％，而与枯草芽孢杆菌B25的一致性只有78．5％。(3)降解苯类化合 物的实验表明： F29融合子具有利用苯甲酸钠作为唯一碳源的能力。它与亲株 相比较有显著提高，最高可在苯甲酸钠浓度10 g／L中生长，在8g／L苯甲酸钠 的培养基中生长状况最好；而其亲本恶臭假单胞菌只能在2g／L苯甲酸钠的培养 基中微弱生长，枯草芽孢杆菌则不能生长。(4)F29融合菌株降解苯酚的能力也 很强，在4g／L浓度的苯酚浓度下生长状况良好，最高能够耐受8g／L的苯酚浓 度。在相同条件之下，两种亲株ASI．1130和B25都不能生长。 研究结果表明融合子F29是一株兼有双亲菌株的部分遗传特性，具有降解苯环 化合物超强能力的融合菌种。它对含苯化合物的污水处理具有潜在的应用价值。 关键词：原生质体融合：苯酚降解；苯甲酸钠降解；恶臭假单胞菌；枯草芽孢杆菌 联系方式：esfan@fudan．edu．伽