里氏木霉木聚糖酶基因Ⅱ在毕赤酵母中的分泌表达与其酶学性质研究.pdfVIP

里氏木霉木聚糖酶基因Ⅱ在毕赤酵母 中的分泌表达及其酶学性质研究 何 军余 冰张 克 英 丁雪梅 陈代文 四川农业大学动物营养研究所，雅安 625014 教育部动物抗病营养重点开放实验室，雅安 625014 摘 要：利用RT-PCR技术从高产木聚糖酶菌株T.reeseiRutC-30中成功扩增出其主要木聚糖 酶基因XynⅡ，经序列分析证实，在该菌株诱变选育过程中其成熟肽序列有两处碱基发生突 变；将不带原基因信号肽的XynⅡ克隆到毕赤酵母高效表达载体pPICZ（a）A上，线性化后经电 击转化到毕赤酵母中，经Zeocin及PCR筛选后得到的转化子用1％甲醇诱导。SDS证 实，重组子实现了分泌表达，且发酵上清中几无杂蛋白；对该重组酶酶学性质分析表明，该 酶最适反应温度为60℃，最适反应pH值为6.0，该酶热稳定性较好，在60℃下保温30min仍 能保留其85％以上活性。 关键词：里氏木霉 ;木聚糖酶 ;毕赤酵母 ;表达 、BMMY~ 氏木霉XynⅡ基 i载体构建 降时间的增加， l__n— t ’U工／Jl__U’一V，