第六章特殊细胞培养.pptVIP

第六章 特殊细胞培养概要 一、上皮细胞培养 二、神经细胞培养 三、肿瘤细胞培养 体内组织细胞在体外培养时，所需培养环境基本相似，但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同，各自要求条件有一定差别，所采取的培养技术措施亦不尽相同。 上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织。 但是，上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。 上皮细胞培养的特殊条件 微生物污染的防范 特殊的生长基质 特殊的培养基 成纤维细胞的去除 实例 表皮细胞培养 乳腺组织培养 胃上皮细胞培养 肝细胞培养 内皮细胞培养 毛细血管内皮细胞培养 实例 表皮细胞培养1．取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成0.5～1平方厘米小块。2．EDTA处理：先置入0.02％EDTA中室温置5分钟。3．冷消化：换入0.25％胰蛋白酶中，置4℃过夜。4．分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。5．温消化：取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小的块后，置入新的0.25％胰蛋白酶中，37℃再消化30～60分钟。6．用吸管轻轻反复吹打，使成细胞悬液。7．培养液：通过80目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸上清