第六节植物克隆载体.pptVIP

* * 第 六 节 植 物 克 隆 载 体 一、Ti质粒载体 1. 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)与Ti质粒 G-菌，可侵入90科双子叶植物受伤组织，形成冠瘿瘤(crown gall tumor)。冠瘿瘤细胞具有以下特征： i. 不需要补充植物激素便可进行离体培养 ii.合成肿瘤特有的化合物—冠瘿碱(opine)，能专一 的为根癌农杆菌所利用. 这两个特征由Ti质粒决定，但该质粒中仅有一部分进入植物细胞。 1) Ti 质粒类型（由Ti 质粒所产生的冠瘿碱种类而定） i. 鱆鱼碱类(octopine) ii. 胭脂碱类(nopaline) iii.农碱类(agropine) 2) Ti 质粒的结构 i. 环状ds-DNA,160-250kb，具六个功能区 i) 致瘤区：合成植物生长素和细胞分裂素 ii) 冠瘿碱合成区：参与冠瘿碱合成 iii) 冠瘿碱分解区：参与冠瘿碱分解 iv) Ti 质粒转移区(tra)：参与不同农杆菌中的接合转移 v) 毒（性）区：参与T-DNA的转移和插入植物染色体 vi) DNA复制区：参与Ti 质粒DNA复制 Ti质粒的结构 ii. T-DNA