凝胶层析法从啤酒废酵母自溶液中分离多肽研究.pdfVIP

翟画画万年囊购萨盟竣蔬面澍蜃 凝胶层析法从啤酒废酵母自溶液中分离多肽的研究一 2 凌秀梅“：，邱树毅∽’，胡鹏刚r，黄永光h (1．贵州大学蔡家关校区化工学院，贵州，贵阳550003；2．贵州省发酵工程与生物制药重点实验室，贵 州，贵阳550003) 摘要 本文就啤酒废酵母制取多肽的过程进行了研究，采用正交法确定了自溶的最佳条件，用 SephadexG-25凝胶层析从啤酒废酵母自溶液中分离出10种多肽，并采用Fe2+．邻二氮菲氧化法测定所得 各分离多肽的总抗氧化能力。 关键词自溶多肽凝胶层析 active 生物活性肽(Bi0109icalpeptides，BAPs)是具有氨基酸顺序的多肽，通过 体内消化释放，并在动物的肠道消化过程中，充当新陈代谢的潜在生理效应物n1。许多小 分子肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质与能量，而且还具有防治疾病、调节人 体生理机能的功能。许多小分子肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质与能量，而 且还具有防病治病、调节人体生理机能的功能。这些功能是原蛋白质和其组成氨基酸所不 具备的，目前，生物活性肽引起食品学术界的广泛重视，而对蛋白质营养价值的评价也从 蛋白质的消化性、氨基酸组成及含量发展到蛋白质序列中某些特定小肽的生理保健功能上 来，实现了蛋白质生物化学、生理学与营养学的一大飞跃。 目前制取生物活性肽多采用大豆，花生为原料，采用廉价的啤酒废酵母作为原料的研 究几乎没有，本试验采用自溶法从啤酒废酵母中制取多肽，用SephadexG一25将这些多肽 分离出来，并采用Fe2+一邻二氮菲氧化法测定所得各分离多肽的总抗氧化能力。 1．材料与方法 1．1材料与仪器 啤酒废酵母由蓝剑瀑布啤酒集团有限公司提供：总抗氧化能力试剂盒南京建成生物工 程研究所；SephadexG-25 Na0H、Hcl等均为分析纯。 PHS一25型精密数显酸度计；TG328A型分析天平；TDL一40B型离心机； Dl(s—12型电热恒温水浴锅；U1『一2550紫外可见分光光度计日本岛津公司。 AKTA Amersh鲫Biosciences公司产； purifine ◇1．6×100cm层析柱上海亚荣公司产： 旋转蒸发仪RE一52B上海亚荣生化仪器厂：ALP卧卜4冷冻干燥机德国。 1．2实验方法 作者简介：凌秀梅(198l一)，女，广东河源人，在读硕士研究生，研究方向，啤洒跋酵母的综合利用 。邱树毅，教授，博上，通讯联系人·跚i丛@g垫：四丛：鲤 ’胡鹏刚。高工．副教授 PRoc￡印l喇 2∞l会议文集I 翟回回秒绰壁锄萨盟拨窳蕊泔镶 1．2．1啤酒废酵母白溶最佳条件的确定采用正交法确定啤酒废酵母自溶的最佳条件。 1．2．2自溶不同时间制取多肽在其它最佳白溶条件不变的情况下，改变白溶的时间，并采 用SephadexG一25凝胶层析分离多肽。 1．2．3采用Fep一邻二氮菲氧化法(南京建成生物_T程研究所提供的T—AoC试剂盒)测定所 得各分离多肽的总抗氧化能力。 1．3检测方法 1．3．1自溶过程中氨基氮含量的测定采用甲醛滴定法测定瞻1 1．3．2SephadexG一25凝胶层析分离多肽 cm×loocm。取5ml自溶不同时间的废酵母液(0．45um膜过滤)， 匀浆装柱，柱尺寸为函1．6 O．5m1／min。在波长280nm处检测洗脱液中的多肽，结果见图1～图5。 1．3．3总抗氧化能力的测定 抗氧化物质能使Fe3+还原成Fe2+，Fe2+可与邻二氮菲结合形成稳固的Fe2+一邻二氮菲络合 物，通过比色测定Fe2’一邻二氮菲含量变化，可了解溶液的氧化还原状态，从而推知体系的 TAC■ 1．3．3．1样本前处理 准确称取多肽重量，按重量体积比加9倍蒸馏水制成10％样品溶液，待测。 1．3．3．2操作步骤 对照管 测定管 试羽I——(mL) 1．O 1．0 10％样品溶液(mL)