微波诱变筛选高产纤维素酶菌株研究.pdfVIP

第二部分新型酶制剂及其应用 151 微波诱变筛选高产纤维素酶菌株的研究 侯红萍 杜文娟 山西农业大学食品科学与工程学院，太谷030801 【摘要】利用透明圈法和刚果红染色法从堆肥中分离出产纤维素酶的霉茵7株。通过测定其羧甲基纤维素(CMC) 等特征，初步鉴定该茵株为黑曲霉(A弦幽rnger)。为了进一步提高茵株D：的产酶能力，对其进行了微波诱变，得到 突变株W4，，其滤纸(H．A)酶活达到128．7U／mL，比D：茵株提高了23．3％。经连续传代，其性能稳定。 【关键词】黑曲霉；纤维素酶；微波；诱变 随着能源危机和环境污染问题的日益严重， 司；TGL-16G高速台式离心机：上海安亭科学仪器 纤维素酶的研究重点逐步转移到开辟新能源和缓 厂；722E型可见分光光度计：上海光谱仪器有限 解环境污染上来。我国的纤维素类资源极为丰富， 公司；HZQ-QX全温振荡器：中国哈尔滨东联电子 x 仅秸杆和皮壳每年可达7 108吨。这些原料大部 科技开发有限公司；双目显微镜：奥林巴斯(上 分被燃烧掉，既破坏了生态平衡，又污染环境。 海)映像销售有限公司；家用微波炉：脉冲频率 若是能利用纤维素酶把天然纤维素物质降解为可 2450MHz，输出功率800W。 利用的葡萄糖，再进一步转化为酒精、气体燃料 1．3培养基 (如氢气)等，对解决当今能源危机和环境污染 1．3．1富集培养基 等问题具有深远的意义。因此，进一步寻找和开 发高产纤维素酶菌株是现今纤维素酶研究的热 酵母膏lOg，K2肝04lg，MgS04·7H200．Ig，NaCI59， FeS04·7H20 点。微波是一种高频电磁波，能刺激水、蛋白质、 0．159，MnS040．5mg，蒸馏水1000mL， 核苷酸、脂肪和碳水化合物等极性分子快速震动， 加热使各成分溶解，三角瓶分装，121℃灭菌 使细胞内DNA分子氢键和碱基堆积化学力受损， 20min。 DNA结构发生变化，从而发生遗传变异。本研究分 1．3．2平板筛选培养基 KH矛Ot 离筛选出一株产纤维素酶活力较高的黑曲霉Dz菌 2．09，(NH4)2S041．49，MgS047H200．39， CaCl2 株，并通过微波诱变获得了纤维素酶活性显著提 0．39，FeS04·7H20 高且遗传性状稳定的突变株。 蒸馏水1000mL，pH自然，加热使各成分溶解，三 l材料与方法 角瓶分装，121℃灭菌20min。 1．1材料 1．3．4液体发酵培养基 羧甲基纤维素钠(CMC-Na)：天津市科密欧试羧甲基纤维素钠(CMC-Na)169，蛋白胨lOg， KI-kP04 0．39，CaCh0．39，蒸馏 剂开发中心，分析纯；刚果红：天津市科密欧试 2．Og，MgS04·7H20 剂开发中心；新华定量滤纸：杭州新华滤纸有限 水1000mL，pH自然，加热使各成分溶解，三角瓶 分装，121℃灭菌20min。 公司；3，5一二硝基水杨酸(DNS)：成都科龙化工 试剂厂；麸皮、玉米芯粉、秸秆粉：市售产品或 1．4菌种