全反式维甲酸对鼠胚神经干细胞增殖和分化的作用.pdfVIP

206 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, February 2008, Vol. 22, No.2 · · 全反式维甲酸对鼠胚神经干细胞增殖和分化的作用 ＃ 钟德君 张德盛 宋跃明 【摘 要】 目的 观察不同浓度的全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid，ATRA ）在鼠胚神经干细胞（neural stem cells，NSCs ）增殖和分化中的作用，寻找促NSCs 分化为神经元的较佳ATRA 浓度。 方法 分离孕12 ～16 d （平均 15 d ）胚胎大鼠脑皮层，用无血清但含神经生长因子（20 ng/mL bFGF 、20 ng/mL EGF ）的培养液悬浮培养，细胞接种密度 6 为1×10 /mL ，7 d 传代。取第3 代NSCs ，分别在含0.5、1.0、5.0 和10.0 μmol/L ATRA （实验组，分别为A 、B 、C、D 组）及 不含ATRA （对照组，E 组）的DMEM/F12 完全培养基中培养，于培养第1、2 、3、4 、5、6 及7 天倒置相差显微镜下计数形 成的细胞球数；于培养后1、3、5、7 及9 d 采用BrdU 免疫荧光染色，分析各组细胞增殖效应。另取第3 代NSCs ，5% FBS 6 培养基调整细胞密度为1×10 /mL ，接种至6 孔板内，分别加入0.5、1.0、5.0 和10.0 μmol/L ATRA，作为各实验组（即A 、B 、 C、D 组），对照组不含ATRA （E 组），于培养后3、5 及7 d 采用免疫荧光双标染色和流式细胞仪检测各组细胞分化为神经 元的比例。 结果 培养后1、2 、3、4 、5、6 及7 d，各实验组增殖细胞球数目接近（P 0.05 ），但均明显少于对照组，且差 异有统计学意义（P 0.05 ）；各实验组在培养后1、3、5、7、9 d BrdU 阳性细胞球增多，组间差异无统计学意义（P 0.05 ）； 对照组各时间点BrdU 阳性细胞球明显多于实验组，差异有统计学意义（P 0.05 ）。各实验组ATRA 促使NSCs 分化为神 经元的比例明显增高，NSE 阳性细胞分化率各组间差异有统计学意义（P 0.05 ），其中B 组最高，在培养3、5、7 d 分别为 29.46% ± 0.47% 、47.25% ± 0.46% 、66.81% ± 0.57%，而E 组NSCs 主要分化为星形胶质细胞，NSE 阳性细胞分化率在培养 3、5、7 d 分别为11.11% ± 0.59%、14.10% ± 0.32%、15.92% ± 0.70%。流式细胞仪检测显示，培养后3、7 d，促神经元分化 比例各实验组与对照组比较差异均有统计学意义（P 0.05 ）。 结论  ATRA 具有显著的促NSCs 分化为神经元的作用， 1.0 μmol/L ATRA 诱导分化效果最佳。 【关键词】 神经干细胞 全反式维甲酸 分化 神经元    大鼠 中图分类号： R651.3 Q813.3 文献标志码：A THE ROLE OF ALL-TRANS-RETINOIC ACID ON THE PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION OF RAT EM- / BRYONIC NEURAL STEM CELLS ZHONG Dejun, ZHANG Desheng, SONG Yueming. Department of Orthopedics, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu Sichuan, 610041, P. R. China. Corres