基于CA杂合启动子基因敲入载体的构建.pdfVIP

华西医学 2008 , 23 (3) 　CN 51 - 1356/ R 43 1 [文章编号] 1002 - 0179 (2008) 03 - 0431 - 03 基于 CA 杂合启动子基因敲入载体的构建 Construction of Based CA Hybrid Promoter Konckin System 崔义元 , 陈米娜 , 王德华 , 李芳华 CUI Yi - yuan , CHEN Mi - na , WAN G De - hua , et al . ( 四川大学华西医院神经分子生物学实验室 , 四川 成都 　610041) (L aboratory of Molecular Neurobiology , West China Hospital , Sichuan University , Chengdu 610041, China) 　　摘要 : 目的: 改造原有的 Rosa26 基因敲入系统 , 引入启动能力更强的 CA 杂合启动子 ( 由鸡 actin 启动子和 ) SV40 增强子融合而成 。方法 : 运用 PCR , 限制性内切酶酶切及 T4 连接酶连接的方法 , 构建带有 CA 启动子的基 因敲入载体 。结果 : 成功地对原有 Rosa26 基因敲入系统进行了改造 , 引入了CA 启动子 , 并且成功构建了mGluR5 基因敲入载体 。结论 : 基于 CA 杂合启动子的基因敲入载体具有更强的启动能力 , 而且能够在某些特定组织中增 强 目的基因的表达 , 为今后研究基因功能及疾病模型小鼠的制备奠定了良好基础 。 关键词 : Rosa26 基因敲入系统 ; CA 杂合启动子 ; mGluR5 [ 中图分类号] Q784 　　　 [文献标志码] A Abstract : Obj ective : To modify the original Rosa26 knockin system and introduce the enhanced CA promoter ( chicken actin promoter fused with SV40 enhancer) . Methods : To make knockin - construct based CA promoter with PCR , restriction en zymes and T4 ligase . Results : Succeeded in modifying the original Rosa26 knockin system , introduced CA hybrid promoter and established mGluR5 knockin construct . Conclusion : Knockin system with the enhanced CA promoter displayed better promotabili ty , also , in certain tissues (brain etc) , gene expression is empowered , laid solid foundation for researching gene functions and constructing mouse disease mode