疏水表面上吸附态a-淀粉酶的吸附行为及DSC与FT-IR研究.pdfVIP

第十--,g,胶体与界面化学会议论文集 疏水表面上吸附态叶淀粉酶的吸附行为及DSC和FT-IR研究料 ：莹亘，耿焦照：，冯小艳，贾永飞，刘爱玲 (西安工程大学，环境与化学工程学院，陕西西安，710048) 疏水表面上吸附态蛋白的热稳定性研究一直受到人们的关注，通过蛋白去折叠的DSC热谱图可 以获得蛋白热稳定性的有效信息，如变性转变温度、变性焓和转变峰的宽窄。其中转变温度直接反 映蛋白的热稳定性。无水环境下的DSC能彻底避开讨论吸附态蛋白分子同水分子之间的相互作用， 从而使人们对吸附态研究蛋白热性质变化的分析变得更有效。相同条件下吸附态蛋白的红外图谱结 果可以分析其二级结构的变化，进一步探讨其构象变化规律 本文采用摇床法，通过改变盐酸胍，硫酸铵及洳淀粉酶浓度测定25℃下变性小淀粉酶在疏水色 谱填料PEG．600表面的吸附等温线。研究发现，一定盐酸胍浓度时，旺一淀粉酶吸附达到平衡所需时 间为3h；硫酸铵浓度恒定为1．2tool·Ld时，泓淀粉酶在疏水表面上的吸附量随着盐酸胍浓度的增加先 减小后增大，吸附量的变化与三种作用力，即去水合作用、亲合力及分子构象作用力的相对大小有 关…。0．7tool·LJGuHCl吸附量达最小值，暗示蛋白可能发生了较大的构象突变，此浓度的盐酸胍可 能使阶淀粉酶活性丧失，而使蛋白分子由于分子间疏水作用发生聚集，抑制了肽链折叠的作用。此 现象与相同条件下色谱研究中发现折叠路径至0．8tool·L。GuHCI时出现一个能垒的事实较吻合曙J。而 改变硫酸铵浓度，盐酸胍浓度恒定为0．8mol·L-1时，Ⅱ。淀粉酶在疏水表面上的吸附量随着硫酸铵浓度 的增加而增大。这是因为硫酸铵是一种易溶盐，这种盐的水溶液有较高的表面张力增加，加入硫酸 铵为溶液提供了一个更利于蛋白通过疏水作用吸附的环境。随着盐浓度的升高，溶液中水的表面张 力也逐渐增加，从而使弘淀粉酶和疏水填料问的疏水作用增强，有利于蛋白吸附，使吸附量增大。 此外，运用计量置换吸附理论(sDT-R)Ij’对高盐浓度(硫酸铵浓度大于1．0mol·L。1)时变性廿淀粉 酶的吸附等温线进行拟合的线性关系照好。SDT-R热力学研究表明，高盐浓度时变性旺．淀粉酶折叠 吸附过程中总的自由能为负值，符合吸附过程的一股规律。 同时，联合差示扫描量热(DSC)和红夕b(Frm)光谱研究了蛋白在疏水表面上吸附折叠时，不同 盐浓度、表面覆盖度和变性程度对Ⅱ．淀粉酶构象变化及热稳定性的影响。研究结果显示，疏水表面 上吸附态变性a．淀粉酶的转变温度低于未吸附的天然a一淀粉酶，表明未吸附的天然a一淀粉酶结构最 完整，稳定性最好。当硫酸铵浓度恒定为1．2mol·L．1时，随着吸附态变性n．淀粉酶表面覆盖度的增 构的酰胺I带峰的面积逐渐减小，而酰胺III峰逐渐出现，但总体酰胺带峰强度增加。表明随着蛋白 表面覆盖度的增加，二级结构含量增加，三级结构变得更加完美，蛋白的热稳定性增强。这可能是 由于随着表面覆盖度的增加，吸附态蛋白分子侧向相互作用增强，空间自由度械小，使肽链不能轻 ’通讯作者： Email：xinpenggeng@163．coin，电话：029 “国家自然科学基金资助项目、西北大学现代分离科学研究所开放基地和陕西省教育厅访问学者资助项 目 2007年7月24．28日中国．福州 易伸展而发生折叠，进一步形成新的更稳定的构象。在蛋白初始浓度相同的情况下，随着盐酸胍浓 度即变性程度的增加，吸附量减小，但转变温度却逐渐升高，二级结构的酰胺IⅡ带峰的强度逐渐减 小。这可能是因为在高的变性剂浓度下，吸附态蛋白部分结构受损，进行结构重排时发生结构丢失， 观察不到较明显的的酰胺I带峰，但酰胺III带峰较明显，使得吸附态蛋白有较强的热稳定性。随着 硫酸铵浓度的增加，转变温度也升高(除盐浓度为1．5mol·L。时，DSC谱图中未出现吸热转变峰)， 同时，指示蛋8--级结构的酰胺I带峰逐渐消失，而酰胺IⅡ带峰逐渐出现。这可能是因为较高的盐 易被观察，但可观察到明显的酰胺III带峰，且其强度大与天然态蛋白，说明了蛋白三级结构变得完 美，稳定性增强。这一规律与先前研究溶菌酶的DSC结果刚好相反【41，表明a．淀粉酶和溶菌酶是两 种性质不同的酶。 参考文献 f1】 GengX．P(耿信鹏)，ZhangH．F(张会芳)，WangB．H．(王保怀)，etal。，J．Therm．Anal．Cal．，82(1)，193，2005．