石英晶体微天平研究核酸探针杂交反应质量传感模型.pdfVIP

第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 B传统电分析化学(含机理研究) ／7 郾7店英晶体微天平研究核酸探针杂交反应的质量传感模型 吴永强1，2 莫志宏1 (1重庆大学生物工程学院，重庆400044) (2四JIl理工学院材料与化学工程系，自贡643000) 1引言 核酸探针杂交是核酸研究中一项最基本的实验技术。其基本原理就是应用核酸分子的变 性和复性的性质，使来源不同的DNA(或RNA)片段，按碱基互补关系形成杂交双链分子。压 电基因传感器检测技术正是基于两条单链DNA在一定条件下发生碱基配对形成双链的原理， 将已知序列的核酸片段作为探针修饰在电极表面，与待测样本核酸进行杂交反应，以检测样 本中相应的基因。Davis[11和Martint21导出了压电免疫反应的动力学模型方程。楚霞‘31等推导了 抗原过量情况下的反应动力学方程。鉴于此，我们导出了核酸探针杂交的压电质量传感模型， 并进行验证。 2探针杂交的压电质量传惑模型 核酸探针杂交反应14J如下： P+T营H (1) 平衡常数表述如下： 耻而丽篙两而 (2) 式中：To为总的靶摩尔数，Po为总的探针摩尔数，H为杂交摩尔数，A为电极面积，v为反 应池体积。 根据石英晶体在包含质量吸附和液体荷载情况下的频移方程可以假设：液相压电石英晶 体的频移与吸附物质的质量成正比，即△厂=一k·Am。则膜上杂交摩尔数H表示为： 日：一垒L 、7 -M， 式中：△f为某一靶浓度点在反应达到平衡时的频移值，△fo为靶浓度足够大、膜上探针被完 全饱和时的频移值，MT为靶分子量。 将(3)式代入2式，整理得下式： 上+1_等 、’(4) Kd·CT 埘 式中cT为溶液中游离靶浓度。在反应初始阶段，游离浓度近似等于靶初始浓度。4式与Langmuir 吸附方程的形式很相似，鉴于此称为Langmuir模型。4式作适当变换，得如下方程： 旦一 ! 士』L r钋 V7 y也．Ⅳo’鲈o (5)式即为核酸杂交反应的压电质量传感模型。 3设备与材料 NFC型多功能计数器(南京通讯仪器厂)，ES·60J电子天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限 公司)，AT切型金电极IOMHz的石英晶振(重庆益升电子器材有限公司)，压电基因传感器 (自制)。HS-DNA(上海生工生物工程公司)：5 3’； 5’CCTGAAATGCTGCGCCGCTC3’ 4实验方法 165 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 B传统电分析化学(含机理研究) 系统稳定后，固定杂交体系中的探针长度、温度、离子强度、缓冲液的pH值。在实验中 分别用不同的探针浓度进行杂交实验。加入合成探针，通过HS—DNA的自组装方法将探针固 定在传感器的电极表面。吸出固定液，用缓冲液洗三次。加入适量靶基因，在一定的条件下 完成杂交反应。记录每次的频率差值。 5结果与讨论 5．1QCM上核苷酸探针的固定 将QCM的金电极清洗，再用Milli．Q水漂洗若干次。将探针寡核苷酸直接固定在金电极 NaCI水溶液中几小时即 上，只要在25℃把QCM浸入带有．SH基的10--30mer核苷酸的0．3M 可。溶液中随固定数量增加，频