耐热冻干保护剂应用与冷冻工艺的研究.pdfVIP

∥杉? ··京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛，，论文集 样品的反转录效率，保证了实验的准确。VHSV—N模板量在102—1010拷贝／反应范围内实时荧光 RT—PCR显示出了良好的线性关系，最低可准确定量检出102拷贝／反应的模板。当模板量降至10 拷贝／反应时，虽然仍可被检出，但是反应管中荧光量的增加值较小，已不能准确定量，只能进行定性。 另外，通过比较标准品重复检测的Ct值可以看出，各浓度样品重复检测的变异系数小，说明该检测体 系稳定并具有良好的重复性。同时，本实验体系与IHNV和SVCV鱼类弹状病毒不存在交叉反应，特 异性好。 为了进一步确认本方法的灵敏性，我们构建了OIE推荐的RT—PCR法检测系统并自建了嵌套 度，大约相差了4个数量级，而实时荧光RT—PCR的灵敏度又比嵌套PCR高出了1个数量级。必须 形成单位(focusformingunits，￡￡u．)计算检出灵敏度，其检出灵敏度为1．6￡￡u．／反应¨3‘。一般 而言，1．6￡f．u．中所含病毒基冈组的拷贝数要大于102拷贝【16 Taqman探针定量检测IHNV感染的鲑鱼脑肾组织时，其最低可以检测100基因拷贝／反应的模板 量¨7J。这与本方法的结果类似。 综上所述，本文用Taqman 备快速、灵敏、特异等特点的基础上，还具有定量准确的优点。同时，其检出灵敏度也优于已有的普通 RT—PCR法、嵌套PCR法和一般荧光RT—PCR法。 参考文献(略) (论文已被高技术通讯接收，近期发表) 耐热冻干保护剂应用及冷冻工艺的研究 李林景小冬张建伟 章振华姜北宇 (北京市农林科学院畜牧兽医研究所 北京100097) 摘要：作者将鸡新城疫和鸡传染性法氏囊病毒分别用耐热冻干保护剂和常规冻干保护剂进行冻 干处理。2℃一8℃保存试验表明，四种疫苗物理性状均符合要求；传染性法氏囊病耐热保护剂疫苗及 常规冻干保护剂疫苗在20C一80C保存JJ个月病毒效价没有差异，耐老化试验也未能使两种疫苗病 毒效价产生明显差异。2℃一80C条件下保存JJ个月的鸡新城疫常规冻干活疫苗效价比新城疫耐热 冻干保护剂疫苗效价降低了D．8个滴度；37。C保存，D天的耐老化试验表明新城疫常规冻干保护剂疫 苗其病毒效价比鸡新城疫耐热冻干保护剂活疫苗病毒效价下降了近2个滴度。以上结果表明，鸡传 染性法氏囊病毒具有较好的耐热性能；而耐热冻干保护剂可显著降低鸡新城疫病毒在长期保存和热 环境中的病毒滴度下降。 目前，在我国兽用疫苗中，活的冻干疫苗占相当大的比例，国内常用的冻干保护剂主要为牛奶、蔗 糖、明胶等，组方简单保护功能差。如果在2℃一8℃条件下，保存期只有4．6个月，多需要在一15。C “京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛，，论文集 Z互夕 下保存。这对生产厂家及使用者造成很大的不便和能源的消耗，常常由于疫苗保存运输不当造成疫 苗的失活，达不到防疫的目的，导致疫病流行而造成巨大的经济损失。 耐热冻干保护剂及冷冻工艺是活疫苗生产的一项关键新技术，采用该技术生产出的疫苗具有较 强的耐热保存性能，这种疫苗可在2。C～8℃条件下贮存，其保存期在24个月以上。且在较高的室温 中可存放数天或数十天也能保持其有效性。与传统冻干苗相比较，无论是贮存、运输或者使用都更方 便和经济。 早在20世纪80年代，发达国家的大型生物制品厂家就已开始进行耐热冻干保护剂的研究，他们 现在的冻干活疫苗基本上使用耐热冻干保护剂。我国的生物制品厂家也陆续在进行这方面的研究， 并取得了一些成果，但仍未达到全面推广应用的层次。随着我国生物制品业的发展，用新型耐热冻干 保护剂及冷冻工艺取代传统的冻干保护剂及其冷冻工艺将是我国生物制品业发展的一个重要方向。 北京信得威特科技有限公司从中国兽医药品监察所引进了鸡新城疫活疫苗及鸡传染性法氏囊病 活疫苗耐热冻干保护剂及冷冻工艺技术，生产出了鸡新城疫耐热保护剂活疫苗及鸡传染性法氏囊病 耐热保护剂活疫苗。为了验证这两种疫苗的耐热性能，我们进行了疫苗的耐老化及保存期试验，现将 结果报告如下。 1材料与方法 ’ 1．1材料 1．1．1疫苗①鸡新城疫耐热保护剂活疫苗(La 年4月；②鸡新城疫常规保护剂活疫苗(La 传染性法氏囊病常规保护剂活疫苗(BJ836株)，其