dd小鼠干细胞因子肥大细胞生长因子(SCFMGF)酶联免疫分.pdfVIP

小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子（SCF/MGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：0.00156 pmol/ml –0.1 pmol/ml 最低检测限：0.0004pmol/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠SCF/MGF，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中 SCF/MGF 含量。 说明 1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何 影响。 概述 干细胞因子（stem cell factor，SCF）又称肥大细胞生长因子（mast cell growth factor，MGF）， 最初是从Buffalo 大鼠肝细胞系中cDNA克隆成功，在小鼠MGF 基因位于第10号染色体SL 基因，是C-kit 的配体（C-kit ligand，KL），因此也称之造血生长因子KL。SCF 主要由肝 细胞产生。人和小鼠SCF 分别由248 和220 个氨基酸组成，约有80％同源性。SCF 可以可 溶性和膜结合两种形式存在，可能与SCF mRNA 剪接或蛋白酶切割位点不同有关。在体内 SCF 以非共价相连同源二聚体形式存在，单体分子量约31kDa， 单体中含有4个半胱氨酸 残基，形成分子内二硫键。糖基对SCF 生物学活性并非必需。SCF 受体即是C-kit，成熟SCF 受体分子由953 个氨基酸组成,其中胞膜外区497 个氨基酸，属免疫球蛋白超家族成员，组 成5 个Ig 样的结构域，与M-CSFR、 PDGFR 有较高的同源性；穿膜区由23 个疏水性氨基 酸组成；胞浆区433 个氨基酸， 含有酪氨酸激酶和自身磷酸化的结构域。SCFR 表达于多 种干细胞、集落形成细胞和肥大细胞等。SCF 的生物学作用有：促进IL-3 依赖的早期造血 前体细胞的增殖和分化；促进肥大细胞增殖；促进黑素母细胞（melanoblasts）的增殖。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗SCF/MGF 抗体的微孔中依次加入标本 或标准品、生物素化的抗SCF/MGF 抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色 的深浅和样品中的SCF/MGF 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值）， 计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate ）： 一块（96 孔）。 2.标准品（Standard）： 2 瓶（冻干品）。 3.样品稀释液（Sample Diluent）： 1×20ml/瓶。 4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）： 1×10ml/瓶。 5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）： 1×10ml/瓶。 6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）： 1×120μl/瓶（1：100）。 7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）： 1×120μl/瓶（1：100）。 8.底物溶液（TMBSubstrate）： 1×10ml/瓶。 9.浓洗涤液（Wash Buffer）： 1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）： 1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof 管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6.蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-