线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的手术操作.docVIP

线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的手术操作 1 　切口位置的选择 恰当切口位置的选择,可以使血管暴露充分,有利操作,节约手术时间,减少对动物的刺激,提高术后生存率。目前国内外学者[ 1 ,2 ]多采用颈部正中切口, 国内一些学者[ 3 ,4 ] 经改良后采用颈部旁侧手术入路。我们在操作中发现,采用颈部旁侧切口不用切开颈阔肌,出血少,便于肌肉分离,手术视野暴露较好,颈内外动脉及其分支的分离易于进行,尤其是分离深在鼓泡处的颈内动脉( ICA) 分支翼腭动脉( PPA) ,如果采用颈部正中切口由于距切口处远而难以分离另外颈部旁侧入口对气管刺激性小,呼吸道分泌物少, 不易出现呼吸道分泌物过多和气管痉挛,手术大鼠病死率低。我们体会采用颈部旁侧手术入路应注意几点,一是中间稍偏015 cm 即可,切口线正好在颈阔肌和胸锁乳突肌夹隙上方,如果太靠外侧会给分离肌肉带来难度;二是用手术刀切开皮肤时不宜用力太猛,颈侧部静脉血管丰富,切入太深容易引起出血,给手术操作带来一定难度,以刚刚切开皮肤为度,并且切口从上到下稍微斜向内侧,并且切口尽量靠上一些,有利于分离颈外动脉。 2 　寻找血管的方法 大鼠颈总动脉(CCA) 位于颈阔肌和胸锁乳突肌之间,上升至甲状腺水平高度分出颈内动脉ICA 和颈外动脉( ECA) 。ECA 在下颌角平面以下分出枕动脉、甲状腺上动脉、咽升动脉、腭升动脉和上颌外侧动脉,在耳下方分出终末支即耳后动脉、颞浅动脉和舌动脉。ICA 在鼓泡和枕骨之间入颅,在鼓泡内侧发出颅外分支PPA(相当于人类上颌动脉) ,主干继续沿鼓室内侧延伸,进入鼓室与枕骨基板之间的后破裂孔进入颅腔。选择旁侧手术入路,切开皮肤暴露组织后,用止血钳钝性分离表层软组织和脂肪组织,然后用止血钳插入颈阔肌和胸锁乳突肌之间,并分离之,用镊子翻开颈阔肌即可看到CCA ,仔细向远心端分离出颈内外动脉的分叉处, 朝上走行的是ECA ,朝下内方走行的是ICA ,继续沿ICA 分离,位于鼓泡的后缘可分离出PPA。尽量在肌肉的夹隙中剥离,减少对肌肉的撕裂,保护血管附近的神经组织。我们在实验中发现,有些造模后的大鼠手术侧出现上肢瘫痪,这与暴露血管时损伤臂丛神经有关,因此应尽可能的保护血管周围的组织,尽量小心剥离相关组织而不要撕裂。 3 　栓线位置的选择 寻找并分离CCA、ICA、ECA 后,阻塞大脑中动脉的血流,在栓线位置的选择上,最早的国外一些学者[ 1 ]采用ECA栓线,具体方法是从ECA 上剪一小口把鱼线从剪口处插入,绕过ICA、ECA 分叉处,插入ICA 或直接剪断ECA 插入栓线。经ECA 插线有两个不足[ 5 ] ,一是剪断ECA 对实验动物的损伤太大,若不剪断,游离ECA ,该动脉与ICA 之间的角度太小(28125 ±1137) ,线栓不易进入ICA ,而且ECA 比较细,剪口很难把握,稍微不注意易把动脉剪断,再灌注取出栓线时由于心脏压力较大,很容易造成内出血导致动物死亡;二是经此处插线,到达大脑中动脉的距离较长,相应的线栓较长,操作时间较长。操作时间过长会刺激血管壁,再灌注时容易形成血栓。国内一些学者[ 3 ]经改良后有人采用在ICA、ECA 分叉处栓线,即在CCA 末端剪一小口把线插入,有人研究[ 5 ]发现该动脉末端附近有颈动脉窦和颈动脉小球,这种方法操作不慎容易引起实验动物血压升高和呼吸异常。并建议经PPA 根部插线,一是鼓泡可以作为手术操作的标志;二是其管径粗,与ICA 之间的角度也大,也可缩短操作时间,减少对血管壁的刺激。但是我们认为栓线须经PPA 根部插入,因大鼠的解剖特点是:手术视野小,分离难度大,易出血,且需要显微器械,因此对技术要求高。 4 　栓线的具体方法 切开皮肤皮下组织,暴露二腹肌肌腹和胸锁乳突肌,寻找到CCA ,分离CCA 并保护迷走神经节,结扎CCA 近心端,向上分离右ECA 与ICA ,用小血管夹夹住CCA 远心端(CCA结扎处与上血管夹处保持5 mm 左右距离) ,在此处放置一打好结的备用丝线,勿收紧线结,在此线下端剪一小口,插入已制备好的栓线头端,收紧线结,松去血管夹,在近CCA 分叉处用眼科镊暂时夹闭ECA ,同时顺CCA 经ICA 将栓线送至颅内,遇阻力而止。我们省去了结扎ECA 而是暂时夹闭ECA ,这样减少了因结扎ECA 带来的损伤,提高了术后生存率,并节约了时间,大约10 分钟就可以完成一只造模。有关是否结扎PPA ,很多学者有不同意见。PPA 是ICA 的颅外分支,它接近颅底,位置较深,在线栓制作大鼠MCAO 模型的手术过程中,处理起来很困难。在制作成年大鼠的MCAO时,多采用结扎PPA 的方法。并且PPA 结扎与否是影响模型成功率高低的重要因素[ 7 ] 。但有人认为在成年SD 大鼠的MCAO过程中可以不必结扎PPA ,