影响羔山羊超排与体外受精效果因素研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第卜四届学术研讨会论文集 影响羔山羊超排及体外受精效果因素研究 赵宏远，桑润滋‘，孙国庆，张文龙，陈晓勇，李瑞岐，孙洁，秦洁 河北农业人学动物科技学院，河北省牛羊胚胎工程技术研究中心，河北保定07100l 摘要本试验研究了不同FsH来源、羔羊日龄、重复超排、受精液pH、精卵共孵育时间对羔山羊超排效果及卵母细胞体外受精效果 并将精卵共孵育时间控制在22—26h，卵母细胞体外受精及发育效果较好．另外重复超排结果表明，供体羔羊可能随日龄增加，其 卵母细胞体外发育能力有增强趋势。 关麓词羔山羊；超数排卵；体外受精；胚胎移植 多年来，很多学者为探讨羔羊卵母细胞体外受精各个环节的影响因素，做了大量工作，体外受精技术取得了长足 进步，但仍然存在一些问题，如超排方案尚无统一标准，个体及品种间超排效果差异较大：羔山羊卵巢卵母细胞的 I、，^I／IVF／ⅣC系统还很不稳定，可重复性差；体外发育系统不够完善等。尤其在国内，羔山羊的体外受精技术不够 成熟。因此，本试验进行了影响羔山羊超排及体外受精效果因素的研究，旨在为改善羔羊体外胚胎生产技术体系提 供实验依据。 l材料与方法 1．1试剂与动物 199液体(Gibco，批号：1193387)：TCM199粉剂(Hycolon， 材料所崩试剂：除非特殊说明均购自si郾阻公司。TcM 本klWasaki，批号：203221)。 试验动物：唐县本地羔山羊、唐山奶山羊羔羊、波尔山羊羔羊及绒山羊羔羊共12只。均为本地常规饲养。 l上羔羊激素处理 同时注射PMSG400IU，FSH总剂量为：新西兰FSH3．52 A．u．／只。最后一次注射激素后 m∥只；日本FsH为15 约14h采卵。 1．3卵母细胞采集 羔羊活体采卵。将供体羔羊保定好，肌注O．1ml左右速眠新II号注射液进行麻醉，并注射青链霉素各一支，下腹 部剪毛，清洗。芝％碘酊棉球涂擦羔羊腹部，然后75％酒精棉球脱碘，在乳房前侧腹中线左右，避开血管，纵向做一个 C03)，当采卵过程中发现抽卵液出现混浊时，应及时将存有卵母细胞的抽卵液转移入lOml离心管中暂存并随即转 入实验室内检取卵母细胞，在实体显微镜下选择带有完整致密的多日丘颗粒细胞，形态正常的卵丘．卵母细胞复合体 液，使其苏醒。间隔30天，对4只羔羊进行重复超排。 1．4卵母细胞体外成熟 lnnlol／LNaHC03+10mmol／L mmol／L 199+5 将挑选出的A、B级卵母细胞分别用采卵液(TCM Hepes+lOHep 培养微滴中，每滴15~20枚卵母细胞。然后在38．7IC5％C02、饱和湿度的条件或负压低氧条件下进行成熟培养。 1．5精子的准备及体外受精 HSOF15 采用上浮离心洗涤法制备精子。37℃水浴解冻1管冷冻精液，然后小心的加到盛有4mL mL离心管的 r／min，5 底部。在37℃水浴锅中倾斜放置30min使精了上浮，然后从上层吸出3．5n儿液体于另一离心管中，1000 mL，使精子密度为5x10¨x min，离心1次，弃上清，然后加入受精液(SOF+20％发情山羊血清+20m∥L肝素钠)1 106个／mL。 lJ L的受精小滴 将体外成熟的卵母细胞吹打除去部分卵丘细胞后，用受精液洗涤3次，移入预先平衡好的30 ·通讯作者：桑润滋(1942．)男，河北滦南人，教授，博t乍导师：i要从事动物胚胎工程及繁殖调控研