用PCR-SSCP筛选鹅PPAR基因SNP研究.pdfVIP

第一篇遗传育种 用PCR-SSCP筛选鹅PPAR基因SNP的研究’ 曲湘勇，何俊，施启顺，柳小春，曾 丹 (湖南农业大学动物科学技术学院，湖南长沙410128) 摘要：PR根基因是近年发现的与脂类代谢有重要关联的核受体基因。本试验以采集 182只75日龄的洞庭草鹅静脉血并提取全基因组后，采用单链构象多态(PCR-SSCP)对 其PR姣基因进行SNP筛选。结果发现在基因序列的215bp处有一个G+A的突变；试 验样本中A、B基因频率分别为o．393和O．607；AA、AB、BB基因型频率分别为 本中杂合子基因型频率较高。 关键词：鹅；PCR-SSCP；PPAR基因；SNP 随着人们生活水平的不断提高，生产和消费低脂优质的肉类正逐渐成为主流。由于肉用 鹅有较高的生长速度和较强的皮下脂肪沉积能力。脂类代谢过程是一个非常复杂的生化反应 过程，是多种调控因子和生化反应共同作用的结果。而PPAR基因对脂类的沉积和分化有着 重要的调控作用[1]。有试验研究表明，PR根基因的活化会诱导动物皮下脂肪和瘦肉组织的 重新分配，调控许多参与脂类代谢的目的基因，尤其是p氧化过程中的一些重要酶类，参与 脂肪的吸收、运输、生成和分解等[2“]。目前有关鹅的Pn恹基因研究还鲜见报道，本试验 对其基因片段DNA多态性进行研究，将为今后进一步开展Pn啵基因与鹅脂肪代谢、沉积 关系方面的分子遗传学相关研究积累资料。 1材料与方法 1．1试验材料 ml，加4％EDTA抗凝， 试验采用75日龄湖南省洞庭草鹅(配套系)182只，翅静脉采血1 迅速保存于冰盒中。采用常规方法提取血液中的全基因组DNA，一20℃保存备用。 1．2引物设计 5．o设计引物，覆盖该基因部 根据GenBank中红原鸡P眺基因的mRNA序列，用Primer 7 3 分编码序列，引物序列为：5ATTACAATGGTTGACACAGA TG 3’。对基因组DNA进行PCR扩增后进行SSCP分析，并统计各种基因型个体数量。 1．3 PCR反应体系 10肛1反应体系：10×buffer(含M92+)1pl，上、下引物(20pmol／L)各O．15pl，dNTPs ng)o．7 (10弘mol／L)o．2p1，Taq酶1U，DNA(100pl，超纯水补至所需体积。 -基金项目。湖南省教育厅资助项目(05c305)，湖南农业大学创新团队基金项目(0411)03)，湖南农业大学青年基金项目 (05QN07)。 手机 ． 331 lj刨采瞬业 帆，g10珧肫 取jHl打增产物，向嬉巾加／、¨pl壁悱制．j。jRI娈性l¨mⅢ后立即冰济jzⅧn。然后取 1‘’pl变性PL、K产物r样-l㈧的聚阿烯酰啵凝脞电淋．电睚保持住眦】～l 2¨v{最适电胍为 jV圳n凝腔)．商至蓝色漳酚蓝染料至凝胶最底端～止， 经过电泳后，将判断为纯台子的佯r语I)NA打增．井送J海英韦刨津公·4测序 【6敷据统计分析 使_}}{sA鼬。软什对试验数据进行统讨分析。 2结果与分析 2 1『JNA电冰结果《琼脂糖电球 通过对DNA电泳，结果发现带比较亮(如圈1所抓，．表明【jNA的纯度和浓度都比较好，¨f 以甩于下步试验， 囤I鹅nNA电津图 22 PCR产物电泓蛄果 带赍于242～33l hp之间-无杂带产生．说明扩增条件是蛙适台的。扩增片段与目的基圈片段大