大鼠创伤后胰岛素抵抗机制地研究.pdfVIP

二＼优秀论文 大鼠创伤后胰岛素抵抗机制的研究 蒋奕吴国豪 复旦大学附属中山医院普外科(上海200032) 摘要 目的：探讨创伤后大鼠胰岛素受体后信号转导通路和外周骨骼肌葡萄糖转运能力的改变 Resistance，IR)之间的关系。方法：通过对大鼠实施小肠部分切 及其与创伤后胰岛素抵抗(Insulin 除手术建立创伤模型，测定大鼠血糖和血清胰岛素浓度，并计算胰岛素抵抗指数(HOMA—IR)和胰 岛素分泌指数(HOMA一13)o运用高胰岛素一正常血糖钳夹技术评估外周组织葡萄糖廓清率。对大鼠 骨骼肌组织中的胰岛素受体底物一l(Insulinsubstrate kinase receptor 1，IRS．1)和蛋白激酶B(protein B，PKB，又名Akt)的磷酸化状态进行检测。【3H】标记葡萄糖示踪法检测创伤后骨骼肌葡萄糖转运 能力的变化。最后分别测定大鼠骨骼肌组织中葡萄糖转运蛋白4(Glucose mRNA和蛋白的表达。结果：大鼠小肠部分切除术后血糖浓度明显升高，血清胰岛素浓度则先短暂 降低然后升高。创伤组大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA—IR)明显高于对照组而胰岛素分泌指数 (HOMA．B)则低于对照组。创伤组大鼠外周组织对葡萄糖的整体利用率下降了49％。骨骼肌IRS．1 磷酸化亦相应减弱。创伤组大鼠骨骼肌对葡萄糖的转运能力明显低于对照组。两组大鼠骨骼肌中 蛋白含量明显少于对照组。结论：大鼠创伤后早期即存在胰岛素抵抗现象，胰岛素实际分泌量并未 减少，但相对分泌量不足。创伤诱导骨骼肌IRS．1的Ser磷酸化增强而Tyr磷酸化减弱，抑制了其下 游PKB／Akt的磷酸化活性，阻碍了正常的胰岛素信号转导，使得外周骨骼肌组织对胰岛素敏感性降 低。骨骼肌细胞中GLUT-4蛋白的转位功能受到抑制，对葡萄糖的转运速率减慢，最终导致胰岛素 抵抗。 关键词：创伤；胰岛素抵抗；信号转导；胰岛素受体底物；葡萄糖转运蛋白 胰岛素抵抗(InsulinResistance，IR)是指正常剂量的胰岛素产生低于正常生物效应的一种状态。 大量临床观察发现手术、创伤、烧伤等情况下普遍存在创伤后胰岛素抵抗现象，且与患者的预后呈 负相关，其发生机制十分复杂，目前尚未完全阐明。研究发现，胰岛素受体后信号转导通路异常及 由此产生的外周骨骼肌对葡萄糖转运利用能力下降是导致胰岛素抵抗的重要原因。在本研究中，我 们通过建立腹部中等程度创伤的动物模型，重点对创伤所导致的胰岛素受体后信号转导通路和骨骼 肌葡萄糖转运能力的变化等方面进行研究，以揭示创伤后胰岛素抵抗的可能机制。 47 一、材料与方法 1．实验动物和动物实验 分离出大鼠颈动、静脉并分别置人直径0．09cm硅胶管，在大鼠腹部正中线切开约8cm长的切口， 缝合腹部切口，整个手术持续约20分钟左右。术后大鼠置于独立的笼中，并给予灯照以保持体温。 2．创伤后胰岛素抵抗检测 采血3001al，对照组大鼠也在相应的时间采血。取251al血液用强生血糖仪当场测定血糖，其余标本 离心后取血清置于．20。E冰箱内，放射免疫法测定血清胰岛素浓度。采用稳态模式评估法(HOMA) 来分别评估胰岛素抵抗指数(HOMA．IR)和胰岛素分泌指数(HOMA．13)oHOMA．IR指数=空腹胰 (mmol／L)．3．5】。 3．高胰岛素一正常血糖钳夹实验 插管取血251al测定血糖，并根据所测值调节葡萄糖输注速率，使得血糖控制在5．0。6．0mmol／L的稳 共6次)，取其平均值作为组织对葡萄糖的廓清率(Glucose Disposal 葡萄糖氧化利用率。 4．创伤后胰岛素受体后信号转导通路变化的检测 取大鼠比目鱼肌50．80mg，于液氮中冷冻并碾碎成粉末状，加入lml蛋白裂解液提取蛋白，Lowry 法检测蛋白浓度，运用WestenBlot方法分别检测不同磷酸化状态下的IRS．1和PKB／Akt。 5．【3H]标记葡萄糖示踪法检测骨骼肌葡萄糖转运能力 术后3小时再次麻醉大鼠，取大鼠比目鱼肌80mg分成4小份，每份20mg左右，立即置于缓冲