低氧对食管癌Eca109细胞体内外侵袭转移的影响及机制及研究.pdf

中文摘要 低氧对食管癌Ecal09细胞体内外侵袭转移的影响 及机制研究 摘 要 食管癌是最常见的恶性肿瘤之一，发病率高且疗效差。目前手术和放 疗是食管癌的主要治疗手段。近年来随着诊疗技术的提高和不断改进，食 管癌患者的生存率有了提高，但是疗效仍不尽人意，5年生存率仍徘徊在 15％左右。术后和放疗后的局部复发和转移是影响食管癌患者预后的主要 因素。因此深入研究食管癌局部浸润和转移的机制并探索有效的治疗措 施，对食管癌的防治具有重大意义。 近年来许多研究发现，低氧是实体肿瘤中存在的一种普遍现象，是其 微环境的基本特征之一。作为一种应激源，低氧能激活肿瘤细胞内的一系 列基因作出应答反应，使很多基因转录活性发生改变，其基因产物可引起 肿瘤细胞发生一系列生物学行为的改变。目前研究表明，肿瘤细胞为了在 低氧环境中保持能量供应，不仅促血管生成能力极大提高，对于放化疗的 抗拒性增加，其侵袭性还极大增强，更易于发生远处转移，从而导致治疗 induciblefactor-1，HIF．1) 失败。在这一过程中，低氧诱导因子．1(hypoxia 起着关键作用，但其复杂的作用机制目前还不十分清楚。HIF—l作为低氧 环境中起中枢纽带作用的转录因子，已成为近年来的研究热点。 HIF．1是由HIF．1Q和HIF．113两个亚单位组成的一种异源二聚体。常 氧条件下，HIF．1Q很容易被降解，其途径是泛素．蛋白水解酶复合体；而 B形成 在低氧条件下，降解过程被阻断，导致HIF．1Q积聚，并与HIF．1 活性形式，影响多种靶基因的表达。HIF．1靶基因结构上均含有低氧反应 元件(hypoxiaresponse 强子中包含的一段特定的核苷酸序列，其核心序列是5’．RCGTG．3’。活 化的HIF．1与其靶基因的HRE结合后，形成转录起始复合物，调节靶基 因的转录。由于HIF．1Q在低氧诱导肿瘤细胞发生的一系列适应性反应中 Q与肿瘤的侵袭和转移的关系有 发挥着重要作用。因此，深入研究HIF．1 着重要意义。 RNA干扰(RNA 中文摘要 技术是将目的基因所对应的小分子双链RNA导入靶细胞内，导致其相应 的mRNA降解，从而阻断特定基因的表达。本研究首先通过观察体外 Q、E．钙黏蛋白及基质金属蛋白酶 CoCl2诱导低氧对食管癌细胞中HIF．1 力的变化，探讨低氧对食管癌迁移及侵袭能力的影响及其作用机制；其次， hair 通过脂质体介导、质粒连接HIF．1Q短发卡状RNA(shortRNA。 shRNA)的RNAi技术，检测HIF．1Q沉默对食管癌Ecal09细胞迁移能 其具体的分子作用机制；最后，通过建立裸鼠移植瘤模型，探讨RNAi 沉默HIF．1 a对食管癌Ecal09细胞体内侵袭转移能力的影响。 第一部分低氧对食管癌Eeal09细胞体外迁移及侵袭的影响 目的：探讨低氧对食管癌迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。 和免疫细胞化学分别检测不同低氧时相时食管癌Ecal09细胞中HIF．1Q、 E．钙黏蛋白及MMP．2mRNA及蛋白的表达。Western 联合低氧处理Ecal09细胞后，HIF—lQ、E．钙黏蛋白及MM．2蛋白的表 细胞迁移及侵袭能力的影响。 a 结果：Ecal09细胞在低氧状态下，HIF．1mRNA无明显变化，仅蛋 达减少；MMP．2 Q及MMP．2表达，促进E．钙 Rapamycin在低氧状态下可显著抑制HIF．1 黏蛋白高表达。经相关性分析，E．钙黏蛋白与HIF。1a呈负相