肝素钠中主要杂质的NMR定量分析方法及污染肝素的分离技术及研究.pdf

肝素钠中主要 染肝素的分离技术研究 摘要 Sodium，HP)是从猪小肠粘膜中提取出来的一种糖胺聚糖 肝素钠(Heparin 类抗凝血药物，具有抗凝血和抗血栓形成的功能，还有抗炎、抗过敏、抑制平滑 肌细胞增殖、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学功能，是需要迅速达到抗凝作用的首 选药物，在临床上得到广泛应用。 在2008年初，美国、欧洲等多个国家发生了严重的肝素钠注射液不良反应 事件，引发数百例病人产生严重的过敏反应，甚至导致了约百例病人死亡。肝素 钠事件在世界范围内引起了广泛的探讨与研究，FDA分析结果表明：该事件与 ChondroitinSulfate，OSCS) 肝素钠中存在的污染物多硫酸软骨素(Oversulfated 有关。OSCS具有和肝素钠相似的结构、相对分子量范围，常规的生物化学方法 难以对其进行检测。为了加强该类原料质量监督，建立一种快速有效的检测HP 中OSCS的方法十分重要。常规的1H—NMR虽可用于两者的检测，但存在检出 of 限(Limitofdetection，LOD)、定量检测限(Limit 缺点。 Hz，窗函数线宽因 mg／mL，定标物TSP含量为O．020％(W／V)，样品旋转为10 在此实验条件另外，LOD为0．01％，比文献报道提高了10倍。应用峰高法和峰 面积法对HP中杂质OSCS进行了定量计算，结果表明峰高法的LOQ为O．1％， 比文献报道提高了5倍。 污染肝素的分离纯化技术可使已污染肝素的价值回归。同时，肝素钠中污染 物OSCS的来源研究对以后肝素钠的生产具有重要意义。 荷数的不同，以离子交换法对两者进行分离，采用单因素试验研究了树脂型号、 树脂用量等因素对两者分离度的影响，最优结果为：树脂型号FBD202，树脂用 以上。 对肝素钠中污染物OSCS来源的研究。从肝素钠的主要原料猪小肠着手，将 猪小肠分离为三部分(肠粘膜、肠衣、浆膜)，分别进行粘多糖组成分析，结果 表明：三者均不含有OSCS，肠粘膜中主要成分是HP，而肠衣及浆膜中主要成 分是硫酸皮肤素。 有机溶剂沉淀法分离提纯肝素钠的研究。肝素钠粗品中含有多种类似物杂 质，如硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate， DS)，根据其在不同极性的溶剂中溶解度不同而进行分离，结果表明：乙醇、甲 醇、丙酮三者均可分离提纯HP，溶剂用量分别为：9．1％一28．6％，33．3％一41．2％， 16．7％一33．3％。 此外，为了从一张核磁共振氢谱上得到更多有效信息，本文用核磁共振氢谱 标准加入法对肝素钠中有机残留(乙醇、甲醇、丙酮)进行了研究，并初步建立 了定量计算肝素钠中有机残留(乙醇、甲醇、丙酮)新方法，结果表明：丙酮的 线性回归方程为v=0．0012x．0．4631，R2=0．9825i乙醇的线性回归方程为 R2=O．9963；本方法采用NMR组学理论，对复杂混合样品的快速分析提供了思路。 关键词：核磁共振肝素钠 多硫酸软骨素 定量分析 分离纯化 II OFMAJOR ANALYSISSTUDY QUANTITATIVE METHODAND BYNMR INHEPARIN IMPURITY HEPARIN FROMCONTAMINATED OSCS SEPARATION