干扰素α对肝癌生长和肺转移影响的实验及研究.pdf

中文摘要 肝细胞癌(HCC)是全球常见第六位肿瘤，并位于肿瘤死因的第三位，虽然 手术仍为主要的治疗手段，但是术后高复发率成为提高患者总体生存的主要障碍， 而抗肿瘤血管生成等靶向治疗有望成为防治肝癌复发转移的新手段。针对单一分 子或单一通路的靶向治疗似乎成为目前解决肿瘤问题的法宝，但先天性和获得性 耐药仍是阻碍分子靶向治疗的难题。此外，昂贵的价格也使绝大多数肝癌患者无 缘承受。分子靶向药物的研发前景究竟是多个分子靶向药物的联合，还是发展多 靶点的药物，也是尚未解决的问题。 干扰素0【(IFSa)作为一个多用途的细胞因子，不仅用于治疗肝癌的背景疾病 ．慢性肝炎，还可直接抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管生成，我所的裸鼠实验 以及临床随机对照研究中明确证实IFNa具备抑制肝癌生长，延缓术后复发的作 用，已成为预防肝癌术后复发的常规治疗方案之一。但是临床研究发现IFNoc_停 药后患者的复发率以及肺转移率增加，提示IFN(I治疗过程中，肝癌细胞可能发 生某些生物学的改变，以适应在IFS(：t的环境中生存。因此有必要研究：(1)IFNa 长期治疗和停药对肝癌生长和转移等特性的影响；(2)IFN(I,治疗对肝癌细胞生 物学的影响；(3)抗血管生成作用作为IFSo【的主要作用机制，其在抑制肿瘤生 长的同时是否诱导肿瘤缺氧，以及上调侵袭转移相关因子，继而增加肿瘤的侵袭 性? 本课题是在原有工作基础上，通过我所建立的具备100％肺转移率的高转移人 肝癌原位移植裸鼠模型模拟临床治疗模式，围绕上述问题进行系统探索。 第一部分 长期应用干扰素仪对肝癌的生长和侵袭转移的影响 本部分应用我所建立的高转移潜能人肝癌原位移植裸鼠模型HCCLM3模拟临床 治疗模式，采用形态学观察方法观察长期IFNa治疗(持续12w)对肝癌生长和 疫组化(IHC)分析以及验证IFN0【治疗过程中主要时间点对肝癌血管生成因子，肿 瘤缺氧的影响；应用体外细胞学实验如肿瘤细胞的增殖，迁移以及侵袭试验等方 法来研究IFNot对肝癌细胞侵袭转移的直接影响；运用流式细胞学技术检测外周 血稳定转染红色荧光蛋I兰t(RFP)的循环肝癌细胞。 1．IFNa能够显著抑制肝癌生长，提高总体生存。 12w的IFNot治疗能够显著抑制肝癌生长，IFNa治疗第2w起，治疗组和对照组 mm3 (给予生理盐水，NS)的肿瘤大小开始有显著性差异，分别为1231．13+212．37 vs．2544．594-369．48 mm3(P=-0．0216)，而且这种差异持续存在，提示长期使用口附0【 治疗不会发生治疗失败的现象。长期吲a能够显著改善裸鼠总体生存，持续 rank,P--O．0067)，在整个疗程，IFNa治疗并未引起任何显著的体重减轻。 2．IFNa主要通过抑制血管生成作用抑制肝癌生长 为进一步研究长期IFNa治疗延缓肝癌生长的机制，我们设计了第二阶段裸鼠动 物实验，设立治疗组和对照组，每组6只，设立4个观察时间点，治疗时间开始 于建立模型后1w，分别为治疗1w,3w,4w,6w。研究提示肝癌生长变化和肿瘤组 瘤血管生成还是肝癌生长的重要基础。通过PCRarray检测，和同期的对照组相 被大大下调，治疗组和对照组的CD31密度分别为5．3oA4-0．6％vs．10．2％士0．4％ (．P=0．0022)，提示此时IFNa能够显著下调肝癌的血管生成。此外，体外实验证 实，IFNoL在100U／ml有明显的抑制HUVEC增殖的影响。表明，IFNtl能够直接 2 或间接抑制血管内皮细胞，可能和减少肿瘤细胞生长的血管生成因子有关。 3．长疗程IFNa治疗可加重肿瘤缺氧，上调侵袭转移相关因子 IFN(I治疗5w后，肿瘤缺氧程度较对照组开始加重，至第7w时显著加重；应用 PCR芯片验证，与相同时间点对照组比较，从肿瘤生长第5w开始，IFNa治疗组 的部分血管生成因子RNA水平开始上调；至第7w时，多数因子显著上调，包 及Westem blotting进一步证实了上述因子的组织和蛋白水平变化。推测这些侵 袭转移因子的上调可能和治疗诱导肿瘤缺氧环境有关。 5．IFNa对肝癌细胞本身无明显直接作用 体外酬a治疗(即对HC