归芪补血精对小鼠粒巨系祖细胞(CFU-GM)体外增殖作用的研究.pdfVIP

农业科学 归芪补血精对小鼠粒巨系祖细胞(CFU—GM) 体外增殖作用研究 尹荣焕 白文林尹荣兰 韦旭斌杜绍范 (沈阳农业大学畜牧兽医学院，吉林大学动物科技学院) 摘要：针对于具有抗贫血、抗氧化作用的方剂归芪补血精，本文研究了其对失血性贫血模型小鼠粒巨系 祖细胞(CFtJ．--CM)体外增殖的影响。结果表明：该复方制荆不仅能够提高失血性贫血模型小鼠的外周血WBC 数量，而且对C兀卜_-GM的增殖速率明显高于空白对照组，说明该方具有很好的抗贫血作用，且其抗贫血的部分 作用机制是启动了造血祖细胞，使其加速了增殖和分化。 关键词：中药抗贫血机理凹『_GM 归芪补血精是依据中兽医“气血”理论，以黄芪行气、当归养血，再配以抗氧化作用较好的何首乌、 绞股蓝等中药研制而成，属于抗氧化和补血作用二者合一的一种复方制剂，在兽医临床上用于鹿缺硒引起 的贫血疗效显著。关于该方的抗氧化及其作用机理曾有报道，但关于其抗贫血作用机理尚未明确。本文采 用造血祖细胞体外培养技术，就归芪补血精对粒巨系祖细胞(C兀卜一GM)体外增殖的影响进行了研究，以 探讨其抗贫血作用机理。 1．材料与方法 (1)材料 ①动物：健康昆明小鼠72只，雌雄皆用，体重204-2克。 ②药品及试剂：归芪补血精配方：当归AngelicaSinensis(Oily)Diels、黄芪As呻kmongholicusBge． Var multiflorum uralensisFisch、丹参Salvia mongholicus(Bge)Hsiao、何首乌PolygonumThunb、甘草Glycyrrhiza miltiorrhiza Bge．与绞股蓝Gynostemma 和浩特医药公司外，其余药物均购自吉林省药材公司，按文献(1】鉴定真伪及质量，根据文献乜1所载炮制方 巴细胞分层液(1．0779／m1)：由鼎国公司提供；RPMll640培养基：由由Gibco公司提供。 器总公司；CELL—DYN1400型血球计数仪产地美国。 (2)试验动物贫血模型的建立【3．4l 表示模型复制成功。正式试验开始，将小鼠按表l随机分成6组，10天后检测。 表1实验动物分组处理 创新与发展 (3)血液WBC的检测 小鼠尾尖采血，用血球计数仪检测。 (4)造血祖细胞(CFU—GM)的体外增殖试验【5’6】 ①骨骼肌条件培养液(SMCM)的制备：颈椎脱臼处死小鼠，无菌取前后肢肌肉组织，用眼科剪剪成 7d后用吸管吸出清亮淡黄色上清液移人500ml大瓶内，混匀后分装，零下20℃冰箱保存。 ③骨髓有核细胞活力的检测：将1滴细胞悬液与2滴2％台盼蓝染液混合后，滴人细胞计数板。2min 后在显微镜下计数至少200个细胞。未着色的为活细胞，呈蓝色的为死细胞。计算活细胞的百分比，大于 95％就可以进行培养。 生物显微镜下计数全皿集落数(每个集落表示来源一个祖细胞)。 2．结果 (1)归芪补血精对贫血小鼠WBC的影响 各中药组小鼠的WBC数量较空白对照组均有不同程度的提高，见表2。其中3％、5％和10％中药剂 组与空白对照组比较差异不显著(PO．05)。 表2中药对小鼠血液WBC、RBC、HGB、RC的影响(+SD) 注： 与空白对照组比较差异显著，P0．05 (2)归芪补血精对CF-I卜—GM体外增殖的影响 各试验组与对照组所形成的cFU—GM细胞集落数见表3。由下表可知，四个不同浓度中药组所生成的 该方剂能够促进贫血小鼠粒巨系祖细胞的生成。 表3CFl卜一GM生长情况(+SD) 注：。与空白对照组比较差异显著。PO．05 48 农业科学 3．讨论 现在一般认为，在造血组织中存在一类能够生成各种血细胞的最原始的细胞，也就是全能造血干细胞 程其实就是造血干细胞一祖细胞增殖分化形成血细胞的动态平衡的过程。而药物可通过影响造血干细胞、 祖细胞的增殖分化等