Cb1-b调节RANKL%2fRANK通路介导的乳腺癌细胞迁移的机制研究.pdf

·中文论著摘要· 移的机制研究 ·●●o!!， 翮再 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。在我国，乳腺癌发病率正以每年3％的速 度递增，是发病率增长最快的肿瘤。骨是乳腺癌最常见的转移部位，晚期乳腺癌 患者约65％．75％将发生骨转移。乳腺癌骨转移导致骨痛、骨折等骨相关事件，严 重影响患者的生活质量。但是，迄今为止，临床上对乳腺癌骨转移的预防尚无有 效的方法，主要是因其机制还未明确。因此，研究乳腺癌骨转移机制对认识乳腺 癌生物学性质和研发新的分子靶向药物具有重要意义。 activatorof 研究证实，细胞核因子kB受体活化因子配体RANKL(receptor NFkB 因子家族成员，通常表达于成骨细胞／骨基质细胞表面，其受体RANK表达于破骨 细胞表面。RANKL与RANK结合后，促进破骨细胞的活化。最新研究发现，RANK 在恶性黑色素瘤细胞和乳腺癌细胞表面也过表达。RANKL使RANK表达阳性的 恶性黑色素瘤细胞和乳腺癌细胞的迁移功能增强。动物实验证实，RANKL使 RANK表达阳性的恶性黑色素瘤细胞的骨转移能力明显增强。但RANKL对RANK 表达阴性的肠癌细胞的迁移功能和骨转移能力并无影响。上述结果强烈提示， RANKI原ANK通路在乳腺癌骨转移中可能发挥重要作用。 该复合体协同酪氨酸蛋白激酶Syk激活下游的Rac、MAPKs和P13K等信号通路， 促进破骨细胞的迁移及活化，同时，C．src与FAK也参与破骨细胞的成熟与分化， 而文献报道，Gab2，C．sfc与FAK均与乳腺癌的增殖、粘附、迁移等密切相关。 活化而发挥作用，尚无文献报道。 黜埘KI瓜ANK通路受泛素．蛋白酶体通路的负调控，泛素．蛋白酶体通路的 精确调控依赖于三种酶的参与，Cbl-b为其中的泛素连接酶，可以特异性地识别需 要降解的底物蛋白。国外研究证实破骨细胞当受到RANKL的刺激后，Cbl．b与 RANK及Gab2结合，诱导其发生泛素化降解。综合文献报道，我们提出如下假 RANKLfRANK通路重要分子的泛素化及降解抑制乳腺癌骨转移。 促进乳腺癌细胞迁移的机制，探讨Cbl．b在此过程中的作用，并进一步通过检测 乳腺癌患者术后癌组织Cbl-b与RANK的表达，分析其与骨转移发生、预后的关 系来验证Cbl．b对RANKL／RANK通路的调控作用。 材料和方法 1、流式细胞仪检测细胞表面受体蛋白的表达。 2、Transwell趋化小室法测定细胞迁移能力。 3、Westernblot检测蛋白表达。 4、免疫共沉降检测蛋白间的共结合。 软件进行t检验。P0．05有统计学意义。 及Kaplan．meier曲线比较、描述PFS及OS。 结果 一、RANKL促进乳腺癌细胞MDA-MB．231迁移 1细胞迁移可被RANKL 迁移增加，迁移指数为1．7。RANKL诱导的MDA-MB．23 的竞争性抑制剂OPG(1099／m1)阻断。 2 1细胞30分钟后，p-AKT表达 (三)RANKL(2pg／m1)刺激MDA-MB．23 Src家族激酶抑制剂PP2(10¨M)显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。 (五)RANKL(21．tg／m1)刺激MDA-MB-231细胞5分钟后p-FAK及p-Gab2 水平升高。 细胞30分钟后，p-FAK及p-AKT水平被抑制而p-ERK的活化不受影响。 二、泛素连接酶cbl-b调控州KL诱导的乳腺癌细胞迁移 表达无明显变化。 V 1，RANKL：2．6士0．3 1．67士0．5，p0．05)。 及C．Src存在共结合。 三、m小K及cbl-b在乳腺癌表达及与临床病理特征之间关系的 研究 远期转移呈负相关(产．0．157，p=o．04)，与淋巴