鸡源致病性沙门氏菌的多重耐药和Ⅰ类整合子的检测研究.pdfVIP

禽类传染囊 方法对某些不宜培养的细菌也往往不能给出理想的鉴定结果。而分子生物学方法的检测对象 是核酸，正可以克服这一缺点，能快速、准确地检测标本中病原微生钫鲍感染。本实验结果 充分证明了这一点。利用本实验建立的PCR方法对病料进行检测的结果与细菌分离结果一 致，但PCR方法耗时短，只需5--6h即出结果，尤其对用药后不易分离细菌的病料更显优势。 参考文献略 鸡源致病性沙门氏菌的多重耐药及I类整合子的检测研究 李戍忠-*l--OiI，王红宁_．一．．·2，黄勇3，马孟根2，昊琦4，羊云飞3，谢涛3，柳萍3 (1．四川农业大学资环学院，雅安四川625014；2．四川大学“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新 平台，成都，6100613、四川农业大学动物科技学院，雅安四川625014； 4．四川农业大学生命理学院，雅安四川625014) 摘要：采用药敏纸片法(NCCLS2004)，对19株鸡致病性沙门氏茵进行了药敏试验，结果19株茼对丁 胺卡那霉素，卡那霉素，庆大霉素，新霉素，链霉素、氨苄青霉素，强力霉素。氟哌酸，头孢三嗪，氯霉 素，磺胺异恶唑，四环素，头孢唑林13种药物的多重耐药率分别为84．21％：耐药谱集中在耐7～lO种的 药物，共有13株茵；根据I类整合子的结构设计了3对引物，对I类整合子的intll、可变区、3’保守端进 行扩增，检测鸡致病性沙门氏茵l类整合子，分析I类整合子与多重耐药的关系．I类整合子检出率为弘．21％ 因。研究结果表明，I类整合子携带的耐药基因与表型之闻没有相关性，但是整合子的分布却比较集中，与 多重耐药之间有密切的关系． 关键词：沙门氏茵：l类整合子；多重耐药；检测 鸡沙门氏菌病是鸡场的重要细菌性疾病，可引起小鸡的大批死亡，产蛋鸡的产蛋量和孵 化率下降，鸡的生长发育受阻，蛋受污染的机率增加，可以经过垂直感染，对养鸡业的危害 极火。在养殖生产中，除了应用疫苗进行免疫预防外，现在主要应用氨基糖苷类抗生素给予 防治。由于抗生素在临床上的大量使用，使得沙门氏菌的耐药性阎题日益突出，而且表现出 多重耐药，对沙门氏茵耐药性进行检测，对防治沙门氏茵感染十分必要。 对细菌的多重耐药耐药机制的探讨，具有捕获及表达外来基因能力的整合子(imegron) 系统作为最新研究的细菌耐药机制，正越来越引起研究者的关注【l，2】。根据整合酶编码基因 intI序列的不同，目前发现有六类整合酶。在整合子介导细菌的耐药机制中，l类整合子起 着非常重要的作用。它的整合酶是含有337个氨基酸的蛋白。5’．保守端有编码整台酶的intll 基因及启动子，大多数3’一保守端包括季铵盐化合物及溴乙锭的耐药基因(q妣厶1)、磺胺类 的耐药基因盒整合到自身染色体上。被整合的基因盒在启动子的作用下，耐药基因得以袭达 使细菌具有耐药性。整合予对细菌的耐药性，尤其是多重耐药性的研究有着非常重要的意义， 研究表明整合子可以携带多种耐药基因盒，可以使细菌同时对十几种扰生素产生抗性【4】。 对I类整合子的检测研究，目前大多是对I整合子的耐药基因盒区进行扩增，由于不同 地区分离菌携带耐药基因的不一致和可变区的片段比较大，不利于整合子的检测和结果的判 定，且不利于摧合子与耐药性之间的关系的研究。本文根据I类整合子的结构设计三对引物， 对临床分离的鸡源致病性沙门氏菌中第一类整合子的分布及携带的耐药基因盒进行了检测 研究，根据李可等的研究，对检测方法进行改进完善，建立检测I类整合子的PCR方法， 从分子水平分析I类整合子和多重耐药的关系及整合子在细菌耐药中的作用。 1材料与方法 “资助项目：圜家“十五”重点科技攻关子课题(2002BASl4A-12—5)． 一作者简介：李戍忠(1980-),男，四川崇州人，五酣啊院生，主=要从事：诒的嘻耐卜H瞒染病分子生物学研究． …。通讯作者：王红宁，女，教授、博士生导师，主要从事畜禽传染病、微生物生物工程的研究．电话： 0835—2886083E-mai 1：whongning穗163．tom 第六■鼍事会簟二次会诚重簟拳专北羹员会2006年会议论文集 1．1菌株 本试验19株菌株分离自四川省、重庆等规模化鸡场，经s．S选择性培养，革兰氏染色 镜初筛。依照GB4789．6．84鉴定出沙门氏菌。分离纯化的沙门氏菌注射入实验小白鼠，从死 亡