海洋放线菌Y12-26代谢产物中农用活性成分地研究.pdfVIP

海洋放线菌Y12-26代谢产物中农用活性成分的研究 杨星1徐文平1，2陶黎明1,2 1.上海市农药研究所 2.华东理工大学药学院 摘要：在农用抗生素筛选中发现代号为Y12-26的海洋放线菌菌株所产生的代谢物对植物病害真菌具有 良好的抑制作用.经过Y12-26发酵产物中活性组分萃取、硅胶柱层析、制备性薄层色谱、HPLC分析与 制备等方法分离纯化得到三个活性组分，分别是Y12-26-Z-1、Y12-26-Z-2和Y12-26-Z-3.通过紫外光 谱、质谱、核磁共振等仪器分析手段，确定了Y12-26-Z-1天然产物分子量为1042，同时确定了其分子 结构；而Y12-26-Z-2和Y12-26-Z-3的分子量均为550.Y12-26-Z-1结构是环肽类化合物，与已知化合 物伊枯草菌素类似，但结构稍有不同.本文初次发现此环肽类化合物具有抗植物病源真菌活性，并测定 了其对稻瘟病菌等的抑制活性. 关键词：海洋放线菌；分离纯化；结构鉴定 。第十届全国新农药创制学术交流会”论文集 1．2活性产物的分离纯化 发酵培养40L，对发酵液进行离心．去除菌丝体，合并发酵上清液，然后用正丁醇萃取2遍，合并 正丁醇相浓缩至干．再用甲醇浸取两遍，过滤除去甲醇不溶物，浓缩除去甲醇获得粗品。粗品经硅胶柱 层析分离。二氯甲烷：甲醇--5：l、2：l和纯甲醇进行洗脱，活性组分主要甲醇洗出部分，经柱层析去 除了大量的非活性组分后，再进行硅胶板薄层层析(TLC)制备。展开剂的配比为甲醇：乙酸乙酯：石 Nucleosil100-7 并经甲醇溶出并除去硅胶粉后．进行HPLC制各，制备柱型号：VP250／21 Cl。．流动相 配比为甲醇：水=62：38时，流速为16ml／min。柱温为室温，紫外检测波长为210nm，分别测得保留时 间为21min的峰(命名为Y12．2每乙1)、保留时间为26 毫克，然后对它们分别进行结构鉴定。整个分离纯化过程中均以稻瘟病菌(t)yriculariaoryzae)进行生物活 性跟踪。 1．3结构鉴定 Avance 500MHz核磁共振仪、气相色谱厂1S行时间质谱联用仪(英国质谱公司MicromassC_论TTIVO、液相色谱／飞 行时间质谱联用仪(英国质谱公司MicromassLCTTM)等。 ml 溶解于0．5 MHz，13C为125 CDCl3中，进行核磁共振扫描(1H为400 Y12．26二2和Y12．26-Z-3由于量不够，没有进行结构分析。 1．4生物活性测定 采用平板拮抗法测定分离所得Y12-26-Z化合物对稻瘟病菌(P0P徊cularia oryzae)、黄瓜灰霉病菌(Bc Botriytis Rhizoctonia Collcctotrichum cinerea)、水稻纹枯病菌(Rs solani)、瓜类炭疽病菌(Cl lagenarium)、 玉米小斑病菌(HmHelminthospodummaydis)等植物病原真菌的抑制作用，并对测定其最低抑菌浓度 twnc)。 2结果与讨论 2．1活性化合物的结构鉴定 还不够进行核磁分析。故只对Y12．2白玉l的结构进行解析． 对化合物Y12．26-Z-1的NMR结果分别进行解谱，根据13D1HHSQC图谱确定O-H相关信息，由 1H．1H COSY和1H．1HNOESY图谱分别确定H．H相关和远程相关信息。根据13C．1HHMBC图谱确定C-H 远程相关信息，综合各种2DNMR的解谱信息，确定各个化合物的具体结构，如图l，其各个C和H 的化学位移分布如表l所示． ·二-·2- “第十届全国新农药创制学术交流会”论文集 表1．化合物