Bt抗虫水稻培育.pdf

中文摘要 本研究以优良的水稻恢复系明恢63为受体材料，采用农杆菌介导的遗传转化方 法，将人工合成的c秒lC*基因和crylAb基因分别转入其中，获得了一批外源基因单 拷贝插入、抗虫性优良及农艺性状良好的转基因株系。在试验过程中，阳性转基因 的筛选经过发芽试验获得，Bt蛋白含量采用ELISA法进行测定。通过室内及田间接 虫试验获得了杀虫蛋白表达量高、抗虫性优良、农艺性状良好、具有商品化价值的 转c，)，IC*基因株系5个和转crylAb基因株系4个。 生物安全性评价的中间试验。目前，纯合转基因株系及初步获得的转双价Bt植株正 在继续试验，进一步考察其大田的抗虫性和遗传稳定性并希望2006年通过在湖北省 的环境释放。 本研究获得的主要结果如下： 转化予92株。 2．Southem 单拷贝纯合系，9个含crylAb基因的单拷贝纯合系。 3．根据高抗虫性、农艺性状没有明显的改变、外源基因单拷贝插入、后代分离符 合孟德尔遗传规律等四个筛选标准，从11个单拷贝的转crylC*基因植株中，获得了5 个候选株系；从9个单拷贝的转crylAb基因植株中获得4个候选株系。 4．室内人工接种试验的结果显示，所筛选的转基因株系对水稻的两种主要钻蛀性 incertulas 害虫二化螟(Chilo walker)表现 walker)和三化螟(Tryporyza suppressalis 高度抗性：在接种一龄二化螟或三化螟幼虫后，其5天内的幼虫死亡率为100％或接 近100％。 5．蛋白含量的EHSA狈4定结果表明：不同转基因株系的Bt蛋白表达量不同，转 c，)，jc·基因株系的蛋白表达量最高为1．42 达量最高为3．66 n咖g鲜叶重。同一株系，分蘖初期与拔节期的蛋白含量没有太大的 差别，说明Bt蛋自在其整个生育期都能稳定表达。此外，转基因株系与其杂种的外 源基因表达水平具有一致性，即转基因亲本株系外源蛋白表达量高，其相应的杂种 的外源蛋白表达量也高，这也说明转基因亲本中的外源基因能在子代中稳定地遗传 和表达。 6．在田问人工大量接虫条件下，转基因株系对一龄二化螟仍然表现高度抗性：对 crylAb基因纯合株系TlAb．6的枯心率仅为I．8％。 7．田间农艺性状考察结果显示：在打药条件下， 转基因株系TIc-19、阴性植株及 对照明恢63的主要农艺性状如株高、分蘖数／株、实粒数／株、千粒重等均没有显著差 异。同样，转基因株系TlAb．6、阴性植株及对照明恢63的主要农艺性状也没有显著差 异。这说明，转基因株系Tlc-19和TlAb．6具有商品化潜力。 目前，正在对这些转基因材料进行聚合试验。 关键词： 水稻农杆菌介导的遗传转化苏云金芽胞杆菌crylAbcrylC*基因 聚合抗虫性Bt杀虫晶体蛋白抗性管理 Ⅱ ABSTI己ACT Stemborersand leaffoldersaretwo of thatcauseSCVCI℃ groupsLepidopteranpests toricein areasofthe 63isaneliteindicarestorer damage many world．MirIghui line，but itis to reducethe of highlysusceptible insects，which yield lepidopteran greatly expected 63and